visfatin对肝脏糖脂代谢影响的研究临床医学;内科学内分泌与代谢病专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 1．选择2型糖尿病(T2DM)、T2DM合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者 及体检正常人群为研究对象，观察不同人群空腹血浆visfatin水平变化，初步探 讨visfatin与T2DM合并NAFLD的关系，为临床诊治NAFLD提供实验基础和 理论依据。2．体外培养正常人肝细胞HL．7702细胞系；观察visfatin对HL一7702 细胞系增殖的影响；研究visfatin影响正常人肝细胞的作用机制，为visfatin有 效的降低血糖、减轻胰岛素抵抗、改善NAFLD等临床治疗提供初步的理论依据． 方法 1．采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了T2DM合并NAFLD组(A组)、T2DM 不合并NAFLD组(B组)以及正常对照组的血浆visfatin水平，同时测定各组的血 糖、血脂、糖化血红蛋白、胰岛素等生化指标，计算腰臀比(WHR)、体质量指 数(BMI)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA．IR)，分析各组visfatin与其他检测 指标的关系；2．体外培养正常人肝细胞，通过倒置显微镜形态学观察。3．将培 养的正常人肝细胞随机分为5组：对照组，visfatin(50ng／mL)组，visfatin(100ng／mL) 组，visfatin(250ng／mL)组，visfatin(500ng／mL)组，每组设5个复孔，分别干预24、 48小时(h)。观察各组细胞的形态学变化，并用MTT法检测不同浓度的visfatin 干预48小时对细胞存活数量和活力的影响，分析不同浓度的visfatin对肝细胞 生长的影响。4．将培养的肝细胞随机分为5组：对照组，visfatin(50ng／mL)组， visfatin(100ng／mL)组，visfatin(250ng／mL)组，visfatin(500ng／mL)组，分别干预1h、 6h、12h、24h、48h。采用酶联免疫吸附法(ELISA)钡9定各组细胞裂解液中磷脂 酰肌醇3．激酶(P13K)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、磷酸烯醇型丙酮酸 羧激酶(PEPCK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的蛋白表达情况。 结果 1．A组与B组比较，收缩压、体重、腰围、BMI、WHR、TC、TG、LDL、 HDL、HbAIc差异均无统计学意义(均P0．05)，但均高于正常对照组(均 P0．01)：A组的FBG、餐后2小时血糖(P2hBG)、Fins、HOMA—IR、visfatin 差异均显著高于B组(尸O．01)。2．直线相关分析显示，120例T2DM患者的血 浆visfatin水平与HOMA—IR、Fins、FBG、P2hBG、BMI、LDL呈正相关(，．分 别为0．886、0．708、0．706、0．492、0．234、0．213，P0．05)；与HDL呈负相关(，． 天津医科大学硕士学位论文为．0．206)；与HbAlc、TG、TC、体重、WHR、SBP、DBP无相关性(P0．05)。 天津医科大学硕士学位论文 为．0．206)；与HbAlc、TG、TC、体重、WHR、SBP、DBP无相关性(P0．05)。 Logistic回归分析表明visfatin、FBG是影响T2DM患者是否发生NAFLD的影 响因素。由ROC曲线得到的visfatin预测NAFLD的临界值(cut off值)5．175ng／ml， 灵敏度为98．2％，特异度为39．1％，OR值为36．84。3．正常人肝细胞HL-7702 的传代培养情况良好。MTT结果表明：不同visfatin浓度干预HL-7702细胞系， 在24h、48h时对细胞的生长均无明显影响。4．ELISA结果：(1)浓度变化趋势： visfatin的干预对P13K、pAMPK、PEPCK的影响呈现浓度依赖性，P13K、pAMPK 的表达随着visfaitn干预浓度的增加而增加，PEPCK的表达随着visfatin浓度的 增加而降低；ACC的表达量随着visfatin干预浓度的变化表现出波动性变化，较 高浓度浓度的visfatin对ACC表达无影响，而较低浓度的visfatin刺激ACC的 表达。(2)时间变化趋势：P13K、pAMPK表达的时间变化趋势较为一致，在干 预1h达到第一个高峰，随后下降，从6h到12h又呈现缓慢上升趋势，12h至 2411升高明显，达第二个高峰，随后又逐渐下降。PEPCK的表达则与P13K、pAMPK 的表达相反，并且干预各时间点PEPCK的表达均较对照明显降低，ACC的表达 因干预浓度的不同表现出不同的变化趋势，50ng／ml visfatin干预组、100ng／ml visfatin干预组在各时间点都是促进ACC表达的，250ng／ml