斑马鱼生长抑素1基因靶向敲降和营救以及基于表达谱的胚胎发育功能分析遗传学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 本论文由 本论文由 国家重大科学研究计划项目(973)： “调控内胚层组织器官发育的分子机制’’ (2009 CB941200) 重庆市农业委员会 “重庆市特色效益水产业关键技术集成示范项目 渝农发2013 12821 资助 万方数据 目 目 录 摘要 ．I Abstract ．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ． ．．．．．．．．．．．．．．．．．V 第一章文献综述 ．1 1．1生长抑素在脊椎动物的进化 1 1．1．1脊椎动物生长抑素的研究 ．1 1．1．2脊椎动物SS的系统进化分析 2 1．1．3六个SS基因在斑马鱼的不同组织的表达模式 2 1．2 SS家族多肽 3 1．2．1 SS l 3 1．2．2 SS2／CST．．． ．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．． ．．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．3 1．2．3 SS3．．．．．．．．．． ．． ．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．． ．． ．．．．．． ． ．．．．．．．．．．．4 1．2．4 SS4．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．4 1．2．5 SS5．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．4 1．2．6 SS6．．．．．．．．．． ．．．．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．!； 1．2．7其他SS相关基因 5 1．3 SS家族受体 5 1．3．1 SS受体的特性 5 1．3．2 SS受体的进化 6 1．4生长抑素功能 7 1．4．1 SSl功能 ．．7 1．4．2 SS2／SCT功能 ．8 1．4．3其他SS相关基因的功能 9 1．5高通量基因表达谱的应用 9 1．5．1数字基因表达谱的原理 ．9 1．5．2数字基因表达谱的特点 10 1．5．3数字基因表达谱的应用 10 第二章绪论 ．．1 1 2．1选题背景与意义 ．．1 1 2．2研究内容与技术路线 ．．1 1 2．2．1研究内容 ．．1 1 2．2．2技术路线 ．．12 第三章实验材料与方法 1 3 3．1材料和试剂 ．1 3 3．1．1实验材料 1 3 3．1．2菌种及质粒 13 万方数据 3．1．3主要试剂及酶类 3．1．3主要试剂及酶类 ．．14 3．1．4主要试剂的配制 ．．14 3．1．5主要仪器 ．．1 6 3．2实验方法 ．17 3．2．1 MOs的合成引物设计 ．．1 7 3．2．2 SSl表达质粒的构建 17 3．2．3 SSl mRNA的体外转录及显微注射 18 3．2．4斑马鱼胚胎总RNA的提取及检测 21 3．2．5表达谱文库的构建及测序 ．．21 3．2．6表达谱测序数据的评估 ．．21 3．2．7基因表达水平分析 ．．22 3．2．8差异表达分析 ．．22 3．2．9差异基因GO富集分析 ．．23 3．2．10差异基因KEGG富集分析 23 第四章实验结果分析与讨论 ．．25 4．1实验结果 ．25 4．1．．1 SSl capped mRNA的体外转录 25 4．1．2显微注射与表型分析 一25 4．1．3总RNA提取质量检测 27 4．1．4 DGE测序数据的产出和表达谱reads的注释 28 4．1．5实验的可重复性 ．．29 4．1．6差异基因聚类分析 ．．31 4．1．7差异表达基因筛选 ．．32 4．1．8共有差异基因的筛选 ．．34 4．2讨论与分析 ．．45 4．2．1 MOs和RNA营救实验在基因功能研究中的应用 45 4．2．2高通量基