大连枣疯病病原鉴定环境科学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 植原体是一类没有细胞壁、存在于植物韧皮部筛管细胞中的植物病原微生 物。它可引起植物黄化、丛枝、花变叶、矮缩或花器退化等症状，导致粮食、 果树、蔬菜、花卉等几百种植物致病。它所引起的病害已遍布世界各地，我国 发生也很严重，其危害程度已上升为仅次于真菌、病毒病害的第三大类植物病 舌。 本研究根据植原体病害的症状学特点，对我国部分省区果树植原体病害进 行了病害调查并采样，以基于植原体16S rRNA基因设计的通用引物、运用巢式 PCR，对其采集到的病样进行了分子生物学检测，以查明该类病害在果树上的发 生现状。对采样中检测出来的大连市枣疯病植原体，进行了基因序列分析及计 算机模拟的RFLP分析，填补了辽宁省大连地区枣疯病病原鉴定的空白。主要研 究结果如下： 1、以基于植原体16S rRNA基因设计的通用引物(R16mF2／R16mRl及 R16F狐16R2)、运用直接及巢式PCR，对从辽宁、河南、湖北等果树产区采集 到的、100多个疑似植原体病害的样本，进行了分子生物学检测，仅在辽宁省大 连市的枣疯病样本中，出现了植原体特异的扩增条带。 2、对大连市发病较严重的营城子区，进行了枣疯病发病率和病情指数的调 查。该区枣疯病平均发病率为22％、病情指数8．67。电镜观察感病叶片的病组 织超薄切片，在其韧皮部筛管细胞中发现了典型的植原体细胞。 3、对大连枣疯株系(JwB．DL)的16S rDNA基因进行了序列测定，该序列 (GenBank登录号为EF661582)为1851个核苷酸。将JWB．DL与NCBI中登 录的序列进行Blast序列比对，结果与属于16SrV的榆树黄化植原体(GenBank 登录号为AFl89214)具有较高的同源性(98％)，推断JWB．DL应属于同一个 组即榆树黄化组(16SrV)。计算机模拟RFLP分析也表明它属于榆树黄化组 (16SrV)。将JWB．DL与所属植原体组中的各亚组代表株系进行16S rDNA序 列比对，通过构建的系统发育树的聚类分析，表明JWB．DL与CLY植原体同属 于16SrV．B亚组。JWB．DL与其它种JWB相比，部分rRNA操纵子序列有所不 同，表明JWB．DL是一个独特种。JWB．DL核糖体蛋白基因rplV-rpsC基因的核 酸序列与麻纤维丛枝植原体(GenBank号：EF029093)一致，而不同于其它JWB 酸序列与麻纤维丛枝植原体(GenBank号：EF029093)一致，而不同于其它JWB 植原体，它代表了一种新的、截然不同的Candidatus Phytoplasma ziziphi植原体。 关键词：枣疯病；病害调查；植原体；分子鉴定 Ⅱ AbstractIdentification Abstract Identification and Pathogen Classification of Jujube Witches’Broom Disease in Dalian Phytoplasmas are phytopathogenic prokaryotes which lacking cell walls and inhibit phloem sieve elements in infected plants．Phytoplasma have been associated with diseases in several hundred plant species，and it may cause the plant exhibiting yellows，witches broom，phyllody and others symptoms．In recent years，this disease has the tendency of causing more loss． According to the symptoms of phytoplasmas，we investigated diseases of phytoplasma and collected samples around the country．Suspicious samples of phytoplasma were detected and identified by nested-PCR assay，in which the universal primers for 16S rRNA of phytoplasma were used．The jujube witches’ broom phytoplasma after identified were analyzed by sequencing and computer-simulated RFLP．It is the firs