雌激素通过trail抑制tnfα诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的机制研究麻醉学专业论文.docxVIP

博士学位论文综上所述，本研究将探讨E2对VSMCs中TRAIL的表达影响，并进一步阐 博士学位论文 综上所述，本研究将探讨E2对VSMCs中TRAIL的表达影响，并进一步阐 明Ez抑制VSMCs增殖和迁移的作用机制。 第一章E2对VSMCs中TNF-a诱导的TRAIL表达影响 为了探讨E2对VSMCs中TNF．0【诱导的TRAIL表达影响，我们分别采用 ELISA和实时荧光定量PCR方法检测TRAIL蛋白和mRNA表达水平，并用MTT 法和细胞划痕实验观察E2对TNF．Gt诱导的VSMCs增殖和迁移的影响。 1．1 TNF—a通过TRAIL促进VSMCs增殖和迁移 首先，我们用不同浓度的TNF一晓(1ng／ml、10 ng／ml、50 ng／ml、100 ng／m1) 处理大鼠的VSMCs 24h，分别用ELISA和实时荧光定量PCR方法检测培养液与 细胞裂解液中TRAIL蛋白表达浓度以及VSMCs中TRAIL mRNA表达水平。结 果显示，TRAIL蛋白表达，与对照组比较，当TNF．。【浓度大于等于10 ng／ml时 可明显增加VSMCs中的TRAIL表达，增长率分别为(56．6+7．8)％、(80．9+9．2)％、 (119．1士11．3)％(n_5，协0．01 VS．CON；唪怔0．001 VS．CON)；TRAILmRNA 表达水平与对照组比较，同样在TNF．a处理浓度大于等于10 ng／ml时可明显增 加TRAILmRNA表达，增长率分别为(110士10．9)％、(180+13．1)％、(220士13．2)％， (n=5，木丰pO。01 VS．CON)。其次，我们用MTT方法检测不同浓度TNF—ct(1ng／ml、 10 ng／ml、50 ng／ml、100 ng／m1)对大鼠VSMCs增殖情况。结果显示，与对照组 比较，当TNF．11,浓度大于等于10 ng／ml时可明显促进VSMCs的增殖，增殖率分 别为(48．6+6．7)％、(66．9+6．9)％、(98．6+8．6)％(n=5，物0．01 VS．CON；木印0．001 VS．CON)。最后，我们用TRAIL的中和抗体阻断TRAIL作用，用细胞划痕实验 观察TNF．0【对大鼠VSMCs迁移能力的影响。结果发现，TNF．cc可明显促进划痕 大鼠VSMCs向中间空白的划痕区域迁移，而用TRAIL中和抗体(20 J_tg／m1)预 孵育24 h，阻断TRAIL信号传导后，TNF．Ⅸ促进大鼠VSMCs迁移能力明显受到 抑制。 1．2 E2呈浓度依赖性抑制TNF．伐诱导的TRAIL表达 III 万方数据 摘要为了观察E2对TNF．0【诱导的TRAIL表达的影响，我们用模拟生理浓度的 摘要 为了观察E2对TNF．0【诱导的TRAIL表达的影响，我们用模拟生理浓度的 E2(10。9M、10。8M、10。7M、10缶M)预处理大鼠VSMCs 24h，再用TNF-仪(100ng／m1) 处理24h，分别用ELISA和实时荧光定量PCR方法检测培养液与细胞裂解液中 TRAIL的蛋白表达水平以及VSMCs中TRAIL mRNA表达水平。结果显示，与 空白对照组比较，TNF．Q明显增加TRAIL蛋白表达，增长率为(164+12．5)％(n=5， 木仄0．001 VS．CON)，用不同浓度E2(10‘9M、10一M、10～M、10。6M)预处理24 h 后可明显抑制TNF．a诱导的TRAIL蛋白表达，其抑制率分别为(10．3-4-3．1)％)、 (35．0士4．8)％、(21．7+4．6)％、(30．7土6．9)％(n=5，肇o．05 VS．TNF-tI；。协o．01 VS．TNF一Ⅸ)；TRAIL mRNA表达，与空白对照组比较，TNF．a明显增加TRAIL mRNA表达，增长率为(210士17．0)％(n=5，半胚O．001 VS．CON)，用不同浓度 E2(10母M、10‘8M、10-7M、10-6M)预处理24h后可明显抑制TNF．仅诱导的TRAIL mRNA表达，其抑制率分别为(18．7-4-3．6)％、(51．6士3．3)％、(47．4士5．1)％、 (44．2土3．8)％(n-5，》o．05 VS．TNF一旺；81刚．01 VS．TNF-a)。 1．3 E2呈时间依赖性抑制TNF．0c诱导的TRAIL表达 我们用10罐M浓度的E2预处理大鼠VSMCs不同时间(6 h、12 h、24 h、48 h)，再用TNF．a(100 ng／m1)处理24 h，分别用ELISA和实时荧光定量PCR方 法检测培养液与细胞裂解液中TRAIL蛋白表达浓度以及VSMCs中TRAIL mRNA表达水平。结果显示，与空白对照组比较，TNF．0【明显增加TRAIL蛋白 以及mRNA表达