生防菌盾壳霉laea基因的克隆与功能研究植物病理学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究目 生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究 目 录 摘要 i Abstract．．．．．．．．．．．．． ．．．．． ．．． ． ．．．．．．． iii 缩略词表(Abbreviation) ．V 第一章文献综述 1 l核盘菌研究进展 1 1-l菌核病的危害 ．1 1．2核盘菌的生物学特性 ．1 1．3菌核病的防治 ．1 2盾壳霉的研究现状 3 2．1盾壳霉的生物学特性 ．3 2．2盾壳霉与核盘菌的互作研究 ．4 2．2．1重寄生作用 一4 2．2．2溶菌作用 4 2．2．3抗菌作用 ．．5 3 LaeA及相关基因的研究进展 5 3．1 VelBⅣe肌aeA复合体 ．．5 3．2 LaeA的发现 6 3-3 LaeA结构及细胞定位 8 3．4 LaeA的功能及调控机理研究 8 3．4．1 LaeA调节丝状真菌次级代谢 ．8 3．4．2 LaeA调节丝状真菌形态发育 ．9 3．4．3 LaeA可能通过染色体修饰参与转录调控 10 4研究意义和主要研究内容 一13 4．1研究意义 ．13 4．2主要研究内容 13 第二章盾壳霉肠鲥基因的克隆与序列分析 14 l材料和方法 14 1．1试验材料 14 1．1．1供试菌株 14 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文1．1．2主要试剂 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文 1．1．2主要试剂 ．14 1．1．3主要仪器设备 15 1．2试验方法 15 1．2．1核酸提取 15 1．2．2盾壳霉LaeA基因(CmlaeA)同源序列的克隆 ．．15 1．2．3盾壳霉LaeA(CmlaeA)基因全长及侧翼的克隆 ．．16 2结果与分析 ．．19 2．1盾壳霉LaeA(CmlaeA)的克隆 ．19 2．1．1盾壳霉LaeA(CmlaeA)同源序列的克隆 ．．19 2．1．2盾壳霉LaeA基因(CmleaA)的全长及启动子序列克隆 ．20 2．2盾壳霉LaeA基因(CmlaeA)序列分析 20 2．3盾壳霉面鲥(CmlaeA)基因表达模式 ．22 3讨论 ．．23 第三章盾壳霉CmlaeA基因的功能研究 24 1材料和方法 24 1．1试验材料 24 1．1．1供试菌株 24 1．1．2主要试剂 24 1．1．3主要仪器设备 25 1．2试验方法 25 1．2．1原生质体的制各 25 1．2．2 CmlaeA敲除和互补转化子的获得 26 1．2．3敲除转化子和互补转化子表达量检测 30 1．2．4敲除转化子和互补转化子生物学特性分析 3 1 1．2-5敲除转化子和互补转化子疏水性检测 31 2结果与分析 ．．3 1 2．1 CmlaeA敲除和互补转化子的筛选 ．．31 2．2 CmlaeA突变体的表达量分析 ．．33 2．3 CmlaeA敲除和互补突变体的生物学特性 ．．33 2．4 CmlaeA对盾壳霉菌丝疏水性的影响 ．．34 3讨{仑 35 第四章CmlaeA对盾壳霉重寄生作用和抗生作用的影响 36 II 万方数据 生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究l材料和方法 生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究 l材料和方法 ．36 1．1试验材料 36 1．1．1供试菌株 ．36 1．1．2主要试剂和仪器设备 36 1．2试验方法 ．37 1．2．1突变体转化子和互补转化子寄生核盘菌能力检测 37 1．2．2盾壳霉重寄生相关酶活性分析 38 1．2．3盾壳霉产生抗真菌物质(AFS)检测 ．4l 2结果与分析 ．．4l 2．1 CmlaeA对盾壳霉重寄生作用的影响 一41 2．1．1 CmlaeA对盾壳霉寄生核盘菌菌丝的影响 41 2．1．2 CmlaeA对寄生核盘菌菌核的影响 43 2．2 CmlaeA对盾壳霉重寄生相关酶产生的影响 一44 2．2．1 CmlaeA对盾壳霉胞外蛋白酶产生的影响 44 2．2．2 CmlaeA对盾壳霉葡聚糖酶产生的影响 45 2．2．3 CmlaeA对盾壳霉几丁质酶产生的影响 46 2．3 CmlaeA对盾壳霉产生抗真菌物质的影响 一47 3讨论 ．．48 第五章结论和展望 。50 1结论 ．．50 2展望 5l 参考文献 52 附录l试验方法、培养基及试剂 63 附录2本试验所涉及的引物序列 ．74 附录3本试验克隆得到的序列 ．75 附录4本试验涉及到的载体 ．78 致谢 ．80 III 万方数据 生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究摘要 生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究 摘要 核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib．)de Bary)是一种世界广泛分布危害严 重