利用rnai水稻化感作用关键酶pal流基因的功能.docxVIP

独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中己作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名： 代J，有日期． D岳。0／．心 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学校有 权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内 容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 必威体育官网网址，在 年后解密可适用本授权书。 口 不必威体育官网网址，本论文属于不必威体育官网网址。 囵 学位(毕业)论文作者亲笔签名： 代J I茵 日期：D分。。‘．心 指导教师亲笔签名：戈渺 日期：醑靠州 摘要 摘要 为证实水稻化感作用的功能性状与PAL基因功能之间的相关性，揭示水稻化感作 用的分子生态学过程与机制，以强化感水稻品种P1312777为材料，从化感水稻 P1312777植株中提取基因组DNA，根据GenBank中PAL基因的保守序列，设计合成RNAi 引物，PCR扩增出PAL基因片段并克隆到pMD-18 T easy载体，测序确定其正确性，获 得PAL基因320bp序列。再将PAL基因片段(320bp)正反向连接于载体PTCK一303内含子 两端，构建成RNAi表达载体PTCK303-S-A，通过根癌农杆菌介导转化水稻，对水稻进 行GUS染色，PCR检测，证明外源基因已经成功整合到水稻基因组中，获得转基因水稻。 荧光定量PCR检测结果：转基因正常氮与低氮PI叶组织中的PAL基因表达量是对照未 转基因正常氮，低氮PI叶组织中PAL基因表达量的70％与75％，转基因正常氮与低氮PI叶 组织中的PAL基因干扰效率分别为30％与25％。与对照未转基因正常氮下相比，对照未 转基因低氮下PI叶组织中的PAL基因上调表达2．12倍。 转基因低氮P工叶组织的PAL基 因也上调表达，与转基因正常氮下相比上调2．32倍。PAL酶活性检测结果：转基因正 常氮PI水稻PAL酶活性下调，与未转基因正常氮P工水稻PAL酶活性相比降1氐64％，说明 PAL基因被干扰。在不同氮素条件下水稻抑草潜力的变化结果：在源于转基因 P1312777正常氮处理液中培养的稗草，其稗草干物重均大于未转基因P1312777、 Lemont正常氮处理液培养的稗草的对应值，其抑制率则小于其对应值，在源于转基因 P1312777低氮处理液中培养的稗草，其稗草干物重均大于未转基因P1312777、Lemont 低氮处理液培养的稗草的对应值，其抑制率则小于其对应值，证实水稻化感作用的功 能性状与PAL基因的功能相关。 关键词：PAL基因；RNAi；GUS染色；荧光定量PCR；PAL酶活性；抑草潜力 AbstractA1lelopathic Abstract A1lelopathic rice P1312777 was used as experiment material to prove functional properties of allelopathy in rice associated with function of PAL gene，and to reveal the process and mechanism of molecular ecology in rice allelopathy．The genome DNA was extracted from leaves of allelopathic rice P1312777．A fragment was produced by polymerase chain reaction using the specific primers designed on the conservative sequence of PAL gene in GenBank． The ampl ified fragment was cloned to pMD一18 T easy vector．and it was verified by sequenc i ng．A DNA fragment wi th the length of 320bp of PAL gene was obtained．To construct RNAi expression vector，PTCK303一S—A，two copies of the 320bp fragment