二氮嗪对窒息新生大鼠心肌线粒体保护作用机制研究-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

学位论文原创性声明 本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成 果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它 机构己经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和 集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律 责任由本人承担。 作者签名: 元吃样 日期: 2011 年 4 月 20 日 学位论文使用授权声明 本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文 被查阅和借阅;学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文: 学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网 公布本学位论文的全部或部分内容。对于必威体育官网网址的论文，按照必威体育官网网址的有 关规定和程序处理。 作者签名: 立 作 导师签名: 日期: 2旦L年土月二Q一日 日期: 2旦L年才一月二旦一日 中文摘要 背景与目的 新生儿窒息如未及时救治可引起各器官系统缺氧缺血损伤，而复苏后又可导致再灌 注损伤，其中心脏、脑等器官对缺氧缺血/再灌注损伤较敏感，多种机制参与该过程。线 粒体是细胞“能量工厂”，通过氧化磷酸化作用产生细胞生存所需 90%的三磷酸腺苷 （adenosine triphosphate，ATP）。近年来，人们对凋亡的认识已逐渐由细胞核为中心的调 控模式转变为以线粒体为中心的调控模式，多种损伤机制最终通过影响线粒体功能导致心 肌细胞凋亡或坏死，而线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore， MPTP）开放是缺血/再灌注导致线粒体损伤并最终致细胞死亡的关键性事件。近年研究发 现，线粒体 ATP 敏感性钾离子通道（mitochodrial ATP-sensitive K+ channels，mitoKATP） 开放对多种组织细胞缺氧缺血损伤有保护作用，参与了缺血预适应和缺血后适应心肌保护 作用。对 mitoKATP 通道的深入研究发现，该通道与 MPTP 之间存在密切关系，但其相互 作用机制仍未完全阐明。 本研究以窒息诱发心肌缺氧缺血损伤的新生大鼠为研究对象，观察心肌损伤程度、 心肌细胞凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor，AIF）表达量，检测心肌 MPTP 开放度、 线粒体膜电位（Δψm）变化、线粒体活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）生成量， 并观察以特异性 mitoKATP 通道开放剂二氮嗪（Diazoxide）干预后心肌损伤程度以及线粒 体功能的变化，以期阐明窒息新生大鼠心肌细胞 MPTP 开放度与心肌损伤之间的关系、 mitoKATP 通道开放剂对窒息后心肌细胞 MPTP 开放度的影响，并进一步阐述 mitoKATP 通 道开放剂对缺氧缺血/再灌注损伤后心肌保护作用机制，为窒息后心肌损伤的治疗提供新 策略。 方法 成年 Sprague Dawley（SD）母鼠怀孕第 21 天行剖宫产，随机分为正常分娩组及动脉 夹闭组，正常分娩组不夹闭子宫动脉，所分娩新生鼠为对照组；动脉夹闭组孕鼠以夹闭子 宫动脉方法制作宫内窒息新生大鼠模型，再将存活新生大鼠随机分为窒息组、二氮嗪组、 格列苯脲组、溶剂组。对照组及窒息组新生鼠出生后不予任何药物干预，二氮嗪组在出生 后腹腔注射 mitoKATP 通道开放剂二氮嗪 3mg/kg，格列苯脲组在出生后腹腔注射二氮嗪 3mg/kg 及 mitoKATP 通道抑制剂格列苯脲 300μg/kg，溶剂组在出生后腹腔注射药物溶剂 0.1mM NaOH 0.5ml。每组各 30 只新生大鼠，于出生 24h 处死新生大鼠，10 只取心脏血 以酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）方法检测血清心肌肌 钙蛋白 I（cardiac troponin I，cTn I），心肌组织用于分离线粒体，以荧光分光光度计检测 MPTP 开放度、线粒体 Δψm、ROS；10 只取心肌组织切片以 TTC 染色方法检测心肌缺血 面积；10 只取心尖组织制作石蜡切片及超薄切片，以 HE 染色及电镜观察心肌细胞及线 粒体形态变化、以免疫组化染色方法检测心肌组织 AIF 表达量。结果以均数±标准差 （ x ??s ）表示，采用 SPSS for Windows 13.0 统计软件进行资料分析。 结果 对照组、窒息组、二氮嗪组、格列苯脲组、溶剂组新生大鼠血清 cTnI 分别为 0.08± 0.04、0.40±0.29、0.10±0.04、0.33±0.17、0.34±0.20（μg/L）（P＜0.01），窒息组明显升 高，二氮嗪干预后下降，格列苯脲组、溶剂组与窒息组相近。各组新生大