细菌发酵制药课件.ppt

3、确定种子罐级数需注意的问题 种子级数越少越好，可简化工艺和控制，减少染菌机会 种子级数太少，接种量小，发酵时间延长，降低发酵罐的生产率，增加染菌机会 虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定。但也与所选用工艺条件有关。如改变种子罐的培养条件，加速了孢子发芽及菌体的繁殖，也可相应地减少种子罐的级数。 二、种子质量的控制 (一)影响孢子质量的因素及控制 影响孢子质量的因素通常有：培养基、培养条件、培养时间和冷藏时间等。 1 、培养基 （1）培养基所用原料要经过发酵试验合格才可使用； （2）严格控制灭菌后培养基的质量； （3）斜面培养基使用前，需在适当温度下放置一定时间； （4）供生产用的孢子培养基要用比较单一的氮源，作为选种或分离用的培养基则采用较复杂的有机氮源。 2、种龄与接种量 种龄：种子培养时间。 一般选择对数期，缩短发酵周期。 接种量：移入的种子液体积与接种后培养液体积比。 多数抗生素的接种量在7%-15%，有时20-25%。依据具 体的发酵类型和工艺条件而定。 3、温度： 温度直接影响生长和酶的合成；最适温度。 4、pH值：对微生物有明显的影响 各种微生物都有生长的最适pH。培养基pH值在发酵时要受菌体代谢的影响。 调节方法 (1) 酸碱溶液中和 (2) 缓冲溶液 (3) 生理缓冲剂 5、通气搅拌搅拌： 促进氧的溶解，营养物质与代谢产物的分散。 通气： 通气量的多少以溶解氧来衡定。 6、泡沫 危害： 影响微生物对氧的吸收。 消泡方法： （1） 消泡剂：天然动植物油、石油化工矿物油；改性油，表面活性剂（有机硅聚合物）； （2） 机械消泡： （3）改变培养基成分。 7、染菌的控制 染菌原因： 设备、管道、阀门漏损、发酵罐结构“死角”、灭菌不彻底、空气净化不好、无菌操作不严、菌种不纯； 8、种子罐级数 种子罐级数越少，越有利于简化工艺，便于控制，减少染菌。 任务4 发酵罐的使用和维护 一、发酵罐的结构 1、空气预处理器 2、电动阀 3、电磁流量计 4、空气预滤器 5、空气精滤器 6、蒸汽过滤器 7、pH 电极 8、电动阀（夹套进冷水） 9、电动阀（夹套进热水） 10、通风管 11、消沫电极 12、消沫器 13、搅拌器 14、检测温度的电热偶 15、DO电极 16挡板 17电机 18、减速器 19、接种孔 20、出水阀 21、夹套 22、冷凝水排除阀 23、取样与放料阀（三向阀门） 图1-6 100L全自动实验罐结构示意图 二、发酵罐的使用 （一）空气过滤器的灭菌操作 1、灭菌前的准备 启动蒸汽发生器 将自来水引入水处理装置进行除杂、软化处理，处理后留入贮水灌，然后开启自动控制开关进行加热，蒸汽压力达到0.2-0.3Mpa时可供使用。 启动冷冻机 将自来水引入冷冻机，开启冷水机电源开关制冷。当冷水温度达到10℃时，可供空气预处理使用。 启动空气压缩机 启动前，先关闭空气管路上所有阀门，然后打开空气压缩机电源开关，启动空气压缩机。当空气压缩机的压力达到0.25Mpa左右时，依次打开管路上阀门，将空气引入冷冻机、油水分离器，经过冷却、除油水后进入贮气罐，待用。 LOGO Edit your company slogan LOGO 学习情境一细菌发酵制药 发 酵 制 药 子学习情境1.1天冬酰胺酶发酵 天冬酰胺酶生产的工艺流程 任务1 菌种保藏任务2 菌种复壮任务3 种子扩大培养任务4 发酵罐的使用和维护任务5 发酵控制、分离纯化及活性测定 子学习情境1 天冬酰胺酶发酵 任务1 菌种保藏 二、菌种保藏的原理 挑选典型培养物（typical culture）的优良纯种，并创造最有利于休眠的环境条件，使微生物处于代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。 菌种的保藏主要是依据微生物的生理、生化特性，人工创造条件使微生物代谢活动处于不活泼状态。利用微生物的孢子、芽孢及营养体，给以不适合其萌发、生长、繁殖的条件，即低温、干燥、缺氧、缺营养等手段来达到菌种保藏的目的。 三、菌种的保藏方法 斜面保藏法 沙土保藏法 冷冻真空干燥保藏法 试管熔封保藏法 矿油保存法 （一）斜面保藏法 1、贴标签：将注有菌株名称和接种日期的标签贴在试管斜面正上方。 2、接种：将待藏菌种用些面接种法移种至标明菌名的相应试管斜面上。 3、培养：细菌置37℃恒温培养15～24h，酵母菌置28～30℃恒温培养36～60h，放线菌和丝状真菌置28℃培养4～7d。 4、收藏：为防止棉塞受潮长杂菌，管口棉花应用牛皮纸包扎或用熔化的固体石蜡熔封棉塞后置4℃冰箱保存。保存温度不宜太低，否则会因结冰脱水而加速菌种的死亡。 斜面菌种 （