13Biacore问答集相互作用测定篇Q50再生溶液或样本是否有必要除气.PDFVIP

Biacore 問答集 13 相互作用測定篇 Q50 再生溶液或樣本是否有必要除氣 ？ A 沒有必要 。 實驗緩衝液 （Running buffer ）在 Biacore T200/T100/4000/3000 等具有除氣 裝置儀器上進行實驗 ，除氣非必要 ，此外含有外加模組 （Plus Package ）的 Biacore X100 也無須除氣 ；只有在 Biacore X 以及未含外加模組的 X100 才需 要將緩衝液除氣 。 Q51 為了確認結合所必需的目標分析物最低濃度 ？ A 預測解離常數 （KD 值 ）以上的濃度為理想濃度 。如果不確定 ，請使用 100nM 以上的濃度 。 Q52 什麼是參考通道 （Reference Flow Cell ）？ A 沒有固定配體的通道 （Flow Cell ）做為控制組通道 （Control ）。根據參考通 道的傳感圖，可以獲知感測晶片表面非特異性吸附及溶液效果（Bulk Effect ）。 目標分析物與感測晶片無特異性吸附的情形下 ，將配體通道的傳感圖扣除參 考通道的傳感圖 ，即可獲得配體與分析物結合訊號 ，排除溶液效果的影響 。 Q53 參考通道的處理方法 ？ A 有以下處理方法 。 ① 不處理 ，保持原本感測晶片表面狀態 ② 使用感測晶片 CM5 ，只經過活化 、去活化的通道 ③ 將不會結合目標分析物的控制組配體 （破壞目標分析物結合部位的配體 或是 BSA 等 ）固定的通道 Q54 參考通道是否在任何流動通道中都可以？ A 由於自動扣除功能有限制 ，因而因系統而異 。（請參照操作手冊 。） Q55 什麼是雙參考 ？ A 將添加零濃度 （0M ＝緩衝液 ）的目標分析物所獲得的相互作用傳感圖 （根 據配體固定通道扣除參考通道的傳感圖），做為另一個參考圖 ，其他各種濃 度分析物添加時的相互作用傳感圖進一步進行扣除 。通過雙參考 ，能夠校正 基線漂移並消除機械雜訊 。特別在結合量 （RU ）小的傳感圖或捕獲法進行 實驗時 ，能夠取得良好的分析結果。 Q56 使用 Biacore 時相互作用的重複性 ？ A 重複添加相同濃度的目標分析物時 ，結合量 （RU ）及傳感圖的形狀應一致 。 若是不同時 ，需要考慮樣品管加蓋或是微量分注的誤差 。 Biacore 問答集 14 Q57 低分子化合物用作目標分析物時的注意點 ？ A 只要低分子化合物的結合量能夠確認 ，就有必要固定配體 。根據所使用的系 統的種類 ，使用 BiacoreT100 時 ，請建立 Rmax 20 以上的實驗系統 。測 定相互作用時 ，必須選擇溶解目標分析物的緩衝液條件 ，如果疏水性高 ，請 使用加入 5% 以下 DMSO 的緩衝液 。另外 ，使用了含 DMSO 的緩衝液必須 進行溶劑校正 。低分子化合物通常有較少的非特異性吸附 ，添加表面活性劑 對於抑制非特異性的吸附有效 。 Q58 什麼是溶劑校正 ？ A 配體固定通道與參考通道中 ，緩衝液的容積不同 （配體佔有體積 ）。使用 DMSO 等溶劑時 ，溶劑的訊號大 ，使得容積差異造成的溶劑效果的差別顯 現出來 。校正這種通道間的溶劑效果差別的操作 ，稱為溶劑校正 。在測定階 段 ，必須利用溶液效果不同的標準溶液來測定校正曲線 。 Q59 是否能夠觀察多個階段的結合反應 ？ A 可以 ，依次添加各樣本 。 Q60 能否根據離子的存在與否來確認相互作用的差異 ？ A 可以 。例如 ，有根據鎂或鉄離子的存在與否來比較相互作用的差異的實例 ，