厄贝沙坦氢氯噻嗪片中厄贝沙坦人体生物等效性研究.docVIP

厄贝沙坦氢氯噻嗪片中厄贝沙坦人体生物等效性研究 　　摘要：目的 研究厄贝沙坦氢氯噻嗪片中厄贝沙坦的相对生物利用度并评价其人体生物等效性。方法 健康男性志愿者22例，随机双交叉单剂量口服受试制剂和参比制剂，剂间间隔为2w。采用高效液相色谱一质谱联用法侧定血药浓度并拟合药动学参数，评价其生物等效性。结果 参比制剂和受试制剂中厄贝沙坦的Cmax分别为2066.3±566.9 ng?mL-1和2001.0±452.0 ng?mL-1；Tmax分别为1.2±0.7 h和1.3±0.7 h；AUC0-24h分别为7787.9±1753.6ng?mL-1?h和8340.0±2397.0ng?mL-1?h；AUC0-∞分别为8477.0±2137.1ng?mL-1?h和8806.8±2546.3 ng?mL-1?h；t1/2分别为8.0±7.7h和7.1±5.5h。与参比制剂相比，受试制剂中厄贝沙坦的生物利用度为（107.4±19.9）%。结论 受试制剂与参比制剂中的厄贝沙坦具生物等效性。 　　关键词：厄贝沙坦；生物等效性；相对生物利用度；液质联用 　　厄贝沙坦氢氯噻嗪片是厄贝沙坦和氢氯噻嗪组成的复方制剂。厄贝沙坦氢氯噻嗪片联合应用，既可通过抑制肾素血管紧张素醛固酮系统改善血压又可降低血容量协同降压，两药的互补使得厄贝沙坦氢氯噻嗪片具有良好的降压效果，同时可逆转氢氯噻嗪引起的血清尿酸升高和血钾降低。故本文建立了LC-MS法测定22名健康男性志愿者口服厄贝沙坦氢氯噻嗪片后厄贝沙坦的血药浓度并拟合药动学参数，评价其生物等效性，为临床用药提供参考。 　　1 仪器、试药与试验对象 　　1.1仪器与试药 仿制制剂：厄贝沙坦氢氯噻嗪片（河北龙海药业有限公司提供）；参比制剂：厄贝沙坦氢氯噻嗪片（赛诺菲安万特（杭州）制药有限公司）；厄贝沙坦对照品、氢氯噻嗪、氯沙坦钾对照品（均由中国药品生物制品检定所提供）；甲醇、甲酸、乙腈均为色谱纯，实验用水为市售乐百氏纯净水。 　　Surveyor MS Pump Plus，Surveyor AS Plus，TSQ Quantum三级四极杆质谱仪（配有电喷雾离子源），BP211D型天平，TG16-WS台式高速离心机，固相萃取小柱OASIS HLB，XW-80A旋涡混合器。 　　1.2 一般资料 18～30岁中国健康志愿者，试验前，对健康受试者进行病史询问和常规体格检查，包括心电图、胸透、肝功、肾功、血常规、尿常规和乙肝表面抗原检查等，共入选22名男性受试者，年龄（24±2）岁，体重（65±5）kg，身高1.72±0.05m，体格检查情况均正常。 　　受试者在试验前3个月内未献血，未作为受试者参加新药试验；服药前2w及受试期间禁用其它药物、烟酒及其它含咖啡因、柯柯碱、茶碱的饮料；受试期间禁止剧烈运动。 　　2 方法与结果 　　2.1实验方案 采用两制剂双周期交叉试验设计。将受试者按体重随机分为两组，一组先服用参比制剂后服用受试制剂，另一组先服用受试制剂后服用参比制剂，清洗期为1w，药物剂量均为厄贝沙坦150mg，氢氯噻嗪12.5mg。 　　服药后2h定量饮水，4h、10h后统一进餐，于服药前及后0.25，0.5，0.75， 　　1，1.5，2，3，4，6，8，12，24，36及48 h由肘静脉采血4mL，置肝素抗凝试管中，3000r?min-1离心10min，分离血浆，置-70℃下冻存，备用。 　　血浆样品，经固相萃取小柱预处理得洗脱液，将洗脱溶液混匀取100 L装入自动进样器小瓶，取10 L进行 LC/MS/MS分析，记录色谱图。 　　2.2 测定条件 　　2.2.1色谱条件 分析柱为Agilent Zorbax SB-C18（1.8 m， 4.6×50mm），保护柱为Phenomenex C18（4 2.0 mm），美国Phenomenex公司；流动相：甲醇-乙腈-1.5；甲酸水溶液（40：25：35， v/v/v）；流速：300 L?min-1；进样量：10 L。柱温：25℃。 　　2.2.2 质谱条件 离子源为电喷雾离子化（ESI）源；喷雾电压为3000 V；鞘气（Sheath Gas ）为45 psi；辅助气（Aux Gas）为5 Arb；碰撞气为1.5mTorr；检测方式为负离子多离子反应监测（SRM），用于定量分析的离子反应分别为m/z 427.2 m/z193.0（厄贝沙坦），m/z295.9 m/z204.9 和268.9（氢氯噻嗪），m/z 421.1 m/z179.1（内标，氯沙坦），碰撞诱导解离（CID）电压为29V（厄贝沙坦），25V（氢氯噻嗪204.9）和22 V（氢氯噻嗪268.9），29 V（内标，氯沙坦），扫描时间均为200 ms。 　　2.3标准曲线的制备 取空白血浆400 L置离心试管