第3章紫外－可见光光度法.ppt

* 4.差示光度法---?A法 定义：用一与供试品浓度接近的标准溶液,代替空白溶液作参比，与供试品溶液进行比较的方法。 基本原理：供试品溶液与参比溶液的吸光度( ?A )与两溶液的浓度差成正比。 适用范围：高含量、稀溶液、高精度 实质：透光率在表尺上的扩展。 * 二、多组分样品的定量方法 －计算分光光度法 若样品中有两种或两种以上组分共存时，可根据吸收光谱相互重叠的情况分别采用不同的测定方法。 * 第一种：按单组分测定方法 第二种：根据吸光度加和性原理计算出b的浓度Cb 第三种：计算分光光度法 * 计算分光光度法 1.解线性方程组法 2.双波长分光光度法 3.三波长测定法 4.导数光谱法 5.正交函数法 * 1.解线性方程组法 (1)分别测定a、b两组分在λ1和λ2处各自的吸光系数E或ε。 (2)测定a、b两组分混合液在λ1和λ2处的A1a+b与A2a+b (3)解线性方程组法计算出a、b两组分的浓度 * 方法要求两组分浓度相差不大 * 2.双波长分光光度法 1)等吸收点法 2)系数倍率法 * 原理 利用两束不同波长的单色光λ1和λ2，以λ1为参比波长、 λ2为测定波长，测定同一样品，可得两波长间的吸光度值之差与被测组分浓度成正比。 * 1)等吸收点法 * 等吸收点的选择： 确定a为被测组分，b为干扰组分。 选被测组分的最大吸收波长为测定波长λ2。 从干扰组分曲线在λ2处的交点引平行线交于干扰组分曲线的另一点，该点的波长即为λ1。 * 选择λ1和λ2的原则： 1.干扰组分b应具有相同的吸光度，即 2.待测组分吸光度差值ΔA 应足够大。 * 根据吸光度加和性原则： 因为 所以 从式中可见：被测组分的浓度Ca只与其在两个波长处的吸收度有关。 * 2）系数倍率法 适用情况： 有的干扰物质的吸收曲线无明显吸收峰（如图中5、6、7、8、9、10图谱中的虚线），无法找出等吸收波长，不能运用等吸收点法时，可以运用系数倍率法。 * * 测定原理 1.在干扰曲线Y上选择两个波长λ1和λ2。注意使被测组分在这两个波长处的吸光度差值ΔA 尽可能大。 2.掩蔽系数 K=Ay1/Ay2 * 3.令KAy2=Ay1，则A2＝K(AX2+Ay2) A1＝AX1+Ay1 ΔA＝A2－A1＝ K(AX2+Ay2)-(AX1+Ay1) = （KAX2-AX1)+(KAy2-Ay1) ＝（KEX2-EX1)CX ＝K’ CX 结果表明： ΔA与被测组分CX成正比。 * 注意 1.选择两个波长λ1和λ2时，应使被测组分在这两个波长处的吸光度差值ΔA 尽可能大。 2.掩蔽系数K的引入，使干扰组分和被测组分的测定都放大了K倍，提高了检测灵敏度，但K值过大，会使噪声增大。当K值＝1时，系数倍率法就是等吸收点法。 * 等吸收点法和系数倍率法的测定步骤 1.配制一系列被测组分的标准溶液，在λ1和λ2处测得Aλ1和Aλ2，得出ΔA标。 2.以C标为横坐标，ΔA标为纵坐标，绘制标准曲线。 3.测得被测组分样品溶液的Aλ1和Aλ2，得出ΔA样，根据标准曲线求得C样，计算含量。 * 第六节 有机化合物分子结构研究简介 有机化合物的紫外吸收光谱主要取决于分子中发色团、助色团及它们的共轭情况，并不能表现整个分子的特性。单独用紫外光谱不能完全确定化合物的分子结构而必须与红外、核磁共振和质谱等配合才能发挥较大作用。在研究化合物的结构中可以推定分子的骨架、判断发色团之间的共轭关系、估计共轭体系中取代基的种类、位置及数目等。 * 紫外光谱提供的结构信息 λ(nm) 现象 化合物结构 220～800 无吸收 脂肪烃、脂环烃及衍生物、非共轭烯烃 220～250 强吸收(lgε≥4) 两个共轭单位 200～250 250～290 强吸收(lgε3～4) 中强吸收(lgε2～3) 苯基 ＞300 强吸收 较大的共轭体系 ＞300 强吸收并伴有精细结构 稠环芳烃、稠环杂芳烃及其衍生物 加碱 λmax红移 酚羟基 加酸 λmax回至原处 加酸 Λmax紫移 芳氨基 加碱 λmax回至原处 * 例：黄酮类成分的紫外光谱分析