《食品酶学第三章》PPT课件.pptVIP

第三章 ;本章重点;酶制剂的来源; 解决问题？;建立一个可靠和快速的检测酶活与纯度的方法，并对整个分离过程中每一步始终贯穿酶活力的测定。 了解所分离酶的结构与性质特点以及酶在细胞中的存在状态。 明确原料的特性与数量。 了解各种方法的原理特性和优缺点并选择有效的分离纯化方法。 各种方法的使用顺序安排合理。 时刻防止酶的变性，操作要在温和或低温的条件下进行。 要充分考虑到介质与溶液体系中各种因子的影响和实际的实验条件。;本章主要内容;表3－1 从 E. coli中分离、纯化天冬酰胺酶; 从表3－1可知，随着分离、纯化过程，酶的比活力越来越高，提纯程度越来越高，其提纯倍数也越来越大，而其总活力、回收率相对降低。 一般试剂级及药品级酶纯度要求高，则采取提纯倍数高的方法。 工业用酶对纯度要求较低，其成本价格显得重要，甚至有时采用粗酶液。 而食品级酶在整个分离、纯化工程中要注意卫生、防止污染，各方面均须综合考虑。;本章主要内容;第二节 酶的提取;一、酶原料的选择; 2. 注意的问题 1）酶存在胞内酶和胞外酶之分，一般而言，胞内酶比胞外 酶难于提取。 2）材料不同，同一材料不同部位或不同生长期，酶的含量不相同。如：脂肪氧化酶在大豆中的含量是在花生中含量的100倍。 3）同一种酶在动物材料、植物材料、微生物材料中性质不同，安全性也不同。 4）选择到合适的材料后应及时使用，防止酶的破坏。 5）植物材料具有一些不利于酶提取的因素，如含有较高的纤维素、色素和单宁；细胞不易破碎；液泡中代谢物复杂等。; 6）动物脏器中含有较多的脂肪，容易氧化酸败导致原料变质，影响纯化操作和酶的得率。 7）微生物具有种类多、繁殖快、培养简便、诱变容易和不受季节地点影响等优点，并且可以通过微生物培养方法富集诱导酶，因此已成为制备酶的主要材料之一。 8）采集的材料在正式进行酶的提取之前，一般都要进行一定的前处理，去除明显可见的杂质和干扰物质。;二、酶源材料的预处理（胞内酶）;机械破碎法包括研磨法和细菌磨法 研磨法 细菌磨法——此法比研磨法省力，其???碎率也比研磨法效率高。 ;物理方法;酶解法;表面活性剂处理法;丙酮粉法;三、酶的抽提;（一）水溶法;盐浓度;pH值;温度;防止酶的作用; 搅拌与氧化 ;（二）有机溶剂法; 例如： 植物种子中的酶——70%-80%乙醇提取； 动物细胞微粒体、线粒体中存在的酶——正丁醇提取，因为正丁醇亲脂性强，可提高酶的溶解度。; 分配定律的定义——在恒温、恒压和比较稀的浓度下，某一溶质在两个不相混合的液相中的浓度分配比是一个常数，即为下式： （C1/C2）恒温、恒压=K C1——表示分配达到平衡后溶质在上层有机相中的浓度 C2——表示分配达到平衡后溶质在下层水相中的浓度 K——为分配常数，不同溶质在不同溶剂体系中有不同的K值。 ; 从上式可知，K值越大，则在上层有机相中溶解度越大；反之， K值越小，则在下层水相中溶解度越大。 如果混合物中各组分k值彼此接近时，则需要不断更换新的溶剂系统，通过多次抽提便可把各种物质分离。 ;本章主要内容;第三节 酶溶液的浓缩;一、真空薄膜浓缩;二、冷冻干燥技术;冻干工艺包括预冻、升华和再干冻三个分阶段。 适用范围： 冰冻干燥特别适用于那些对热敏感、易吸湿、易氧化及溶剂蒸发时易产生泡沫而引起变性的生物大分子，如蛋白质、酶、核酸、抗菌素和激素等。;冷冻干燥技术; 2. 装样品溶液的容器 ①最好用各种尺寸的培养皿盛样品溶液，液层不要太厚，以免冻干时间太长。也可以使用安培瓶和青霉素小瓶。 ②冻干稀溶液时会得到很轻的绒毛状固体样品，容易飞散而损失和造成污染，因而要用刺了孔的薄膜或吸水纸包住杯口。 3. 溶液冰冻 尽可能用干冰～乙醇低温浴速冻，如能将盛有样品溶液的容器边冻边旋转形成很薄的冰冻层，则可以大大加快冻干的速度。 ;4.冻干 ①样品全部冻干前，不要轻易摇动，以防水蒸汽冲散冻干的样品粉末。 ②样品冻干达到较高真空度时，容器外部有时会结霜，若外霜消失，则说明样品已冻干。 ③冻干后要及时取出样品，以免样品在室温下停留时间过长而失活。 ④关真空泵时要先放气，以免泵油倒灌。放气时要缓慢，以免气流冲散样品干粉。 ⑤样品冻干后要及时密封冷藏，以防受潮。 ⑥真空泵要经常检查油面和油色，通常半年或一季度至少要换一次油。 ;三、超滤技术; ;2. 超滤膜的材料 醋酸纤维素、各种芳香聚酰胺、聚砜和 聚丙烯腈-聚氯乙烯共聚物。 3. 超滤膜主要