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常见临床标本微生物检验程序 　　摘要：目的：探讨常见临床标本的微生物检验程序。 　　方法：以白色念珠菌为例，建立白色念珠菌临床标本的检验方法与检验程序。 　　结果：白色念珠菌在沙氏葡萄糖培养基中，35℃时生长状态较好；显色培养基上25℃时生长较慢，菌落为乳白色，35℃时生长良好，菌落为浅绿色；在吐温80-玉米粉培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基上生长较为缓慢。白色念珠菌蔗糖发酵试验阴性，葡萄糖、麦芽糖发酵试验阳性，尿素分解试验阴性。 　　结论：尽管各微生物的生化特性千差万别，但对其进行的检验程序大致是相同的，都必须进行标本分离、菌种鉴定、药敏试验三个步骤。 　　关键词：临床标本白色念珠菌微生物检验程序 　　 　　【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1008-1879（2012）10-0006-01 　　临床微生物检验程序主要包括三个步骤，即标本分离、菌种鉴定、药敏试验，其中，菌种鉴定过程的速度是决定微生物检验过程快慢的决定因素1。建立合理的微生物检验方法与检验程序对提高检验结果的准确性与检验速度具有重要的作用。白色念珠菌是临床标本中常见的酵母样真菌。本文以白色念珠菌为例，探讨常见临床标本的微生物检验程序。 　　1材料与方法 　　1.1材料。菌株为白色念珠菌标准株（ATCC 10231）、热带念珠菌。培养基有沙氏葡萄糖琼脂/液体培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基、乳糖/蔗糖/麦芽糖/葡萄糖发酵培养基、血培养基、吐温80-玉米粉培养基。 　　1.2方法。首先制备菌液，挑取斜面培养基培养的新鲜培养物接种至液体沙氏葡萄糖培养基中，置于25℃培养24或48小时后，将菌液稀释成30～100cfu/ml。取1ml菌液分别置于沙氏葡萄糖琼脂培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基和吐温80-玉米粉培养基，在不同的温度25℃、35℃、38℃下，培养1、2、3、4、5天后，计数活菌数并进行比较。 　　挑取沙氏葡萄糖琼脂培养基、氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基和吐温80-玉米粉培养基中的菌落接种于显示培养基中，于25℃培养24小时后，观察显色情况并用显微镜观察菌落形态。 　　挑取沙氏葡萄糖琼脂培养基、氯化三苯四氮???-沙保罗琼脂培养基和吐温80-玉米粉培养基中的菌落进行生化试验（糖发酵试验、尿素分解试验）。 　　2结果 　　白色念珠菌在沙氏葡萄糖培养基中，35℃时生长状态较好，活菌数高于25℃培养条件下的活菌数。在沙氏葡萄糖培养基上，白色念珠菌的菌落呈圆形、乳白色、大小为5微米左右，较粘稠，菌落中央突起。革兰氏染色呈阳性，菌体呈不均匀着色，芽管与假菌丝不清晰。 　　白色念珠菌在显色培养基上25℃时生长较慢，菌落为乳白色，较小；35℃时生长良好，菌落为浅绿色，随着生长时间的延长，菌落颜色可逐渐加深至绿色。热带念珠菌菌落为蓝绿色，随生长时间延长可逐渐加深至深蓝色。 　　显微镜观察白色念珠菌经革兰氏染色后，菌体着色不均，可见厚膜孢子以及模糊不清的假菌丝。利用显色培养基可以将酵母菌与假丝酵母菌区分，同时也可将白色念珠菌与热带、克柔、光滑酵母菌相鉴别。 　　白色念珠菌在吐温80-玉米粉培养基上生长较为缓慢，在显微镜下可见大量假菌丝以及厚膜孢子。白色念珠菌在氯化三苯四氮唑-沙保罗琼脂培养基上生长也较为缓慢，菌落较小。白色念珠菌在血培养基上生长迅速，在显微镜下可见大量假菌丝以及厚膜孢子。 　　生化试验结果显示，白色念珠菌蔗糖发酵试验阴性，葡萄糖、麦芽糖发酵试验阳性，尿素分解试验阴性；热带念珠菌蔗糖、葡萄糖、麦芽糖发酵试验阳性，尿素分解试验阴性。 　　3讨论 　　白色念珠菌，即白假丝酵母菌，是一种条件致病菌。患者感染白色念珠菌后可引起脑膜炎、肺炎、心内膜炎、阴道炎、鹅口疮甚至败血症等疾病2。 　　微生物检验方法参照《中国药典》中相关检验方法。首先将供试品制成10倍稀释的供试液。取出10ml供试液后加入100ml沙氏培养基中，置于35℃培养箱内培养48小时，进行增菌。真菌大量增殖后逐渐沉淀于培养瓶底部。继而将增菌后的培养液取出少量于显色培养基中进行四区划线，将显色培养基置于35℃培养箱内培养72小时，培养结束后将培养基取出观察菌落的颜色。在显色培养基上，白色念珠菌的菌落应为绿色，菌落大小为直径约2μm，热带念珠菌的菌落应为深蓝色，菌落大小为直径约1.5μm，克柔念珠菌的菌落应为粉红色，菌落大小为直径约4.5μm，光滑念珠菌的菌落应为紫色，菌落大小为直径约2μm，其他种类念珠菌的菌落为白色，菌落大小不定。 　　将增菌后培养液取出1ml加入吐温80-玉米粉培养基、血培养基中，置于35℃培养箱内培养48小时。挑取典型菌落涂片后置于显微镜下使用高倍镜观察真菌假菌丝与芽管。在显微镜下可见白色念珠菌有较多厚膜孢子。 　　最后将显色培养基