第八章微生物遗传和变异PPT.ppt

2、营缺型的筛选 （1）三种基本培养基 ●基本培养基[-] :满足野生型菌株生长 最低营养要求的组合培养基。 ●完全培养基[+] ：满足所有营缺型菌株 生长营养要求的天然或半组合培养基。 ●补充培养基[A]，[B] ：满足相应营缺型 菌株生长营养要求的组合或半组合培养基。 （2）三类遗传型个体 ●野生型：从自然界分离获得的菌株不论 营养状况如何，均称为~。（A+B + ） ●营缺型：野生型菌株经诱变由于代谢障 碍,而必须添加某种物质才能生长的突变株。 （A+B - ） （A-B + ） ● 原养型：营缺型回复突变后的菌株。 （A+B + ） 基本基[-] 完全基[+] 补充基 [A] 野生型 + + + 营缺型 — + + 原养型 + + + （3）筛选步骤 1）诱变 2）淘汰野生型：抗生素法、菌丝过滤法 3）检出： 夹层培养法；限量补充法 逐个检出法；影印平板法 ●夹层培养法 1）制备基本 培养基； 2）加充分洗 涤菌悬液； 3）加待测营 养物； 4）观察生长。 （4）鉴定缺陷类型(生长谱法) ● 定位（点）诱变 盒式诱变 寡核苷酸引物诱变 Strain improvement for fermentation and biocatalysis processes by genetic engineering technology 建议读物 §.3 基因重组 ●基因重组（狭义遗传重组）： 两个独立基因组内的遗传物 质，通过一定的途径转移到一 起，形成新的稳定的基因组过程。 ●遗传工程 ----基因重组技术 经典、同源、生物自然属性、 体内 ----DNA重组技术 (基因工程)： 分子水平、同-- 异源、体外 一、原核生物的基因重组 （一）转化 受体菌直接吸收供体菌游离的 DNA片段而获得部分遗传性状的现 象。 1、转化的基本条件 （1）感受态： 受体菌最容易接受外源DNA 片段并能实现转化的一种生理状态。 影响因素： ---遗传因素（感受态因子;种属的特异性） ---外部因素（CAMP、聚乙二醇、二价阳 离子; 低温低渗CaCl处理、培养条件） ●大小： 每一转化DNA片段分子量约 1×107， 约 占染色体组0.3%，平均 15个基因。 ●结构：一般转化因子都是线状双链DNA，少数为 线状单链DNA。 ●转化频率：0.1～1%（很低），最高10%，质粒 为良好的转化因子。 ●浓度：?10-5 ug/ml （2）转化因子 ●转化因子 非交换 2、转化过程 1）酶解和吸收单链 2）同源区配对、 整合 3）复制 4）形成转化子 ●利用选择标记鉴别携带外源片段的转化子 (双抗菌素对照筛选） 建议读物 §.2 基因突变和诱变育种 一、基因突变 ●野生型菌株：从自然界分离获得的菌株， 称之为? 。 ●基本培养基(MM)：满足野生型菌株生长最 低营养要求的合成培养基。 （一）突变类型 ●营养缺陷型：野生型菌株由于突变而丧失 了某种营养合成能力，而无法在基本培 养基上生长的变异类型。 表示： 基 因：his+，his - ； 表 型：His + ，His – 完全培养基：满足各种营缺型菌株生长营养要求的天 然或半组合培养基。 ●抗性突变型： 野生型菌株由于突变而产了对某些化学药物或致死物理因子抗性变异类型。 表示： 基 因： strr、strs； tetr、tets； 表 型：Str r