血清mir-19b mir-29c在鼻咽癌诊断中的作用及其分子通路初探-role of serum mir - 19b mir - 29c in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma and its molecular pathway.docxVIP

PAGE PAGE 2 独 创 声 明 本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨医学学风。所呈交的 硕士生学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作近取得的研究 成果。除文中一明确标注的引用内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已发表或撰写过的论文及学术成果内容。与我一起工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规 定，即：学校有权保留学位论文及想国家有关部门或机构送交论文复 印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、 缩印或其他手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将 本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会 公众提供信息服务。 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期： 年 月 日 签字日期 ： 年 月 日 目录 中文摘要………………………………………………………4 ABSTRACT………………………………………………………6 英文缩略词表…………………………………………………10 前言……………………………………………………………12 试剂……………………………………………………………18 仪器……………………………………………………………23 方法……………………………………………………………24 结果……………………………………………………………31 讨论……………………………………………………………37 结论……………………………………………………………47 参考文献………………………………………………………47 综述……………………………………………………………53 攻读硕士期间发表的学术论文………………………………61 致谢……………………………………………………………62 附录……………………………………………………………63 血清 miR-19b、miR-29c 在鼻咽癌诊断 中的作用及其分子通路初探 中 文 摘 要 背景：鼻咽癌是一种与 EB 病毒感染有关、多基因参与、遗传与 环境因素协同作用的恶性肿瘤，在我国两广、福建发病率较高,其发 病具有性别差异，男性发病是女性的两倍以上。miRNA 是一种广泛存 在于动、植物以及病毒中的非编码小分子 RNA，它通过与靶 mRNA 结 合抑制蛋白的翻译或降解 mRNA。MiRNA 在染色体上的位置与肿瘤密切 相关，它通常位于与肿瘤发生有关的染色体区域。另外，miRNA 还受 表观遗传学调控，通过诱导沉默表达的肿瘤抑制基因（TSGs）再表达， 从而发挥抑制肿瘤的作用，因此 miRNA 的表达升高或降低可以起到致 癌作用或抑癌作用，它的差异表达与肿瘤密切相关。近年来，人们在 血清、血浆中发现存在大量 miRNA ,而且这些 miRNA 具有一定的特性： 血清 miRNA 具有抗 RNA 酶、抗酸、抗碱、抗冻融处理的稳定性；在正 常人中血清 miRNA 的表达基本是一致的，但是肿瘤患者血清 miRNA 的 表达却有明显差异，而且这些 miRNA 的差异表达程度与肿瘤的良恶性 及预后呈一定的相关性，因此血清 miRNA 具有成为肿瘤分子标记物的 条件。曾有学者对鼻咽癌患者的组织 miRNA 表达谱进行了检测，发现， 在鼻咽癌患者中有些 miRNA 表达明显改变，例如，miR-29c 的表达较 PAGE PAGE 10 正常人下调 5 倍，而本课题组前期研究也发现，在潜伏膜蛋白 1 （latent membrane protein 1，LMP1）阳性表达的鼻咽癌细胞株中 miR-19b 表达升高 10 倍以上。目前，关于 miRNA 靶基因的预测有多 种，但其具体的分子作用机制仍有待探讨。 目的：（1）分别检测血清 miR-19b、miR-29c 在鼻咽癌病人、鼻 咽癌病人放化疗后以及非癌人群中的表达差异，探讨其作为鼻咽癌临 床诊断分子标记物的意义,以及探讨其作为鼻咽癌放化疗后检测复发 标记物的意义（2）分别检测鼻咽癌病人和鼻咽粘膜慢性炎病人的组 织蜡块中 miR-19b 靶基因 SOCS-1、miR-29c 靶基因 COL1A1 的差异表 达，从而对 miR-19b、miR-29c 的分子通路作一个初步探讨，为以后 鼻咽癌的靶基因治疗提供一项依据。 方法：（1）收集鼻咽癌病人、鼻咽癌放化疗后病人、非癌人群血 清各 30 例，然后通过 RNA 提取、逆转录、荧光定量 PCR 技术，分析 血清 miR-19b、miR-29c 在