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免疫学实验;实 验 须 知;实验室规则;实验一 与免疫相关的细胞形态的观察;血涂片的制作方法; 嗜中性颗粒白血球： 体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1—5叶，核叶之间联以染色质细丝，染色质染成粉色，其中充满细小的大小均匀的颗粒被染成紫红色。直径10—12微米。 ; 嗜酸性颗粒白血球： 略大于嗜中白血球，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。直径10—15微米。 ; 嗜碱性颗粒白血球： 体积略小于嗜酸性白血球，细胞质中有大小不等被染成紫色颗粒，颗粒数目较嗜酸性白血球的颗粒少，核为1—2叶染成淡兰色。直径10—11微米。; 淋巴细胞： 涂片中可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红血球大小相似，圆形。其中含致密的核，染成深紫色。周围仅有一薄层嗜硷性染成淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较大，有较宽层的细胞，核圆形。6-8微米。;单核细胞： 体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20微米。 ;肥大细胞： 胞体较大，呈卵圆形，胞质内充满粗大均等的嗜硷性颗粒。其中含肝素、组织胺等物质。常成群地分布于血管的周围，主要为组织细胞。 ;浆细胞： 细胞呈圆形或卵圆形，胞质丰富，呈嗜硷性。核圆形，着色深，多偏于细胞的一侧，染色质核膜呈车轮分布。正常组织浆细胞少，慢性炎症时增多。 ;巨噬细胞： 又称组织细胞，细胞形态不规则。常伸出短而钝突起，有很强的吞噬能力 ;实验二 沉淀反应;（一）环状沉淀反应;（一）环状沉淀反应;（一）环状沉淀反应;琼脂扩散试验 ;双向琼脂扩散试验;双向琼脂扩散试验;双向琼脂扩散试验;影响琼脂扩散的因素;实验三 血凝与血凝抑制实验;实验原理;;;;;;实验四 间接ELISA实验; 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。同时抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原??抗体起反应。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 ;;实验材料 1.抗原 流感病毒血凝素蛋白(HA) 2.兔抗HA血清 3.ELISA板、封闭液、洗涤液、TMB底物、终止液、酶标仪等。;实验步骤： 1.抗原的包被：1ug/孔 抗原（HA）包被24小时。 2. 封闭：每孔100ul封闭液，37度封闭30min，然后洗涤3-5次，每次至少3min。 3.一抗反应：设定两孔加入PBS作为空白对照，每孔加入稀释好的一抗（1：400开始倍比稀释6孔）100ul，37度反应1小时以上，然后洗涤3-5次，每次至少3min。 4.二抗反应：每孔加入稀释好的二抗（1：10000）100ul， 37度反应0.5-1小时，然后洗涤3-5次，每次至少3min。 ;5. 底物显色： 每孔加入配制好的底物液50ul，37度避光反应10-15min。 6. 显色终止及读数： 上述显色的孔内加入50ul终止液，上酶标仪读数。酶标仪读数波长是450纳米。 ;实验结果 根据抗体的稀释度，确定抗体的效价。