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分子印迹电位型传感器快速检测猪尿液中克伦特罗 　　摘 要 以盐酸克伦特罗为模板分子，采用沉淀聚合法合成了克伦特罗的分子印迹聚合物，并以其为离子载体，制得分子印迹聚合物膜克伦特罗离子选择性电极。在最优实验条件下，电极对克伦特罗阳离子的检出限可达7.0 × 10 　　?Symbolm@@ 8 mol/L，线性范围为1.0 × 10 　　?Symbolm@@ 7～1.0 × 10 　　?Symbolm@@ 4 mol/L，能斯特斜率为55.7 mV/decade。此电极具有优越的选择性、快速的响应时间以及良好的稳定性；已成功应用于实际猪尿样品中克伦特罗的测定，加标回收率为98%～107%，检测时间小于3 min。 　　关键词 分子印迹聚合物； 电位型传感器； 克伦特罗 　　 2011-08-10收稿；2011-09-22接受 　　本文系国家自然科学基金（No.、山东省自然科学杰出青年基金（No.JQ200814）以及山东省“泰山学者”人才计划项目资助 　　* E-mail: wqin@yic.省略 　　1 引 言 　　“瘦肉精”的主要化学成分包括克伦特罗、莱克多巴胺以及沙丁醇胺等，其中在中国使用最广泛的是克伦特罗。克伦特罗是一种肾上腺素类神经兴奋剂，早期仅用于医学急救和肺病平喘；后来发现，将其作为饲料添加剂用于畜牧生产时，可以提高动物瘦肉率。然而，克伦特罗使用后会在动物体组织中残留，人食用后会对肝、肾等内脏器官造成损害，严重者甚至会死亡[1]。2011年，我国相继发生的“瘦肉精”事件，引起了人们对克伦特罗的高度关注，因此开发生物样品中克伦特罗检测方法具有重要意义。 　　目前，检测克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法（HPLC）[2]、气相色谱-质谱法（GC-MS）[3]、金标快速检测卡、免疫层析［4］和酶联免疫法（ELISA）[5]等。然而，HPLC和GC-MS法存在仪器成本高，分析速度慢等缺点；金标快速检测卡法的假阳性率高，干扰因素较多；ELISA法多用于定性检测，难以进行准确定量。化学传感器因其具有操作简单、携带方便、易于现场监测等优越性能而备受关注。聚合物敏感膜离子选择性电极是化学传感器的重要分支，它具有装置简单、成本低廉、选择性高等诸多优点，已成功应用于工业分析、临床化验、环境监测等领域[6～8]。然而，采用离子选择性电极电位法检测克伦特罗的研究还未见报道。 　　分子印迹聚合物（MIPs）是通过分子印迹技术合成对目标分子具有特异性识别功能的聚合物[9，10]。MIPs能够显著提高分析方法的选择性和灵敏度，且MIPs具有较强的稳定性, 可以抵抗检测的恶劣环境。因此MIPs是离子选择性膜电极在复杂基体中实现可靠检测的理想离子载体。本研究以克伦特罗分子印迹聚合物作为离子载体，采用离子选择性电极法，实现了猪尿液中克伦特罗的快速、高灵敏、高选择性电位检测。2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　PXSJ-216离子计（上海精科公司）；DU-800紫外/可见光分光光度计（美国Beckman公司）；S-4800冷场发射扫描电镜（日本日立公司）。 　　盐酸克伦特罗标准品（中国食品药品检定研究院）；甲基丙烯酸（MAA）、甲基丙烯酸甲酯（MMA）、丙烯酸三甲氧基丙烷三甲酯（TRIM）、二乙烯基苯80（DVB 80）、高分子量聚氯乙烯（PVC）、邻硝基苯辛醚（o-NPOE）、四（3,5-二（三氟甲基）苯基）硼酸钠（NaTFPB）、四氢呋喃（THF）及盐酸莱克多巴胺（Sigma-Aldrich公司）；偶氮二异丁腈（AIBN，天津科密欧化学试剂有限公司）。MAA、TRIM、DVB 80以及THF使用前须真空蒸馏，AIBN使用前经甲醇重结晶，其余试剂均为分析纯试剂直接使用。实验用水均为二次去离子水（Pall Cascada，18.2 MΩ cm）。0.1 mmol/L克伦特罗（pK?a＝9.6）溶液采用5 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液（pH 7.4）配制，以保证克伦特罗以阳离子形式存在；其余浓度均采用缓冲溶液逐级稀释得到。 　　2.2 克伦特罗分子印迹聚合物的合成 　　采用沉淀聚合法合成克伦特罗分子印迹聚合物[11]，具体合成步骤如下：取0.4 mmol盐酸克伦特罗、?2.5 mmol MAA和0.83 mmol MMA，溶于40 mL甲醇中，静置1 h。将1 mmol TRIM和0.4 mmol DVB及?0.5 mmol AIBN加入到上述混合物中，通氮气10 min。将上述反应容器在氮气氛围下密封，于70 ℃下反应24 h，得到白色固体颗粒。将所得白色固体颗粒分别采用甲醇-乙酸溶液（9∶1，V/V）及甲醇多次洗涤，直至洗脱液于紫外光谱下λ＝245 nm处无吸收峰为止。非分子印迹聚合