第二章 紫外-可见分光光度法 现代食品检测技术知识 .pptVIP

例1：铁（Ⅱ）浓度为5.0×10-4 g·L-1的溶液, 与1,10-邻二氮杂菲反应,生成橙红色络合物.该络合物 在波长508 nm ,比色皿厚度为2cm时,测得A=0.190 。 计算1,10-邻二氮杂菲亚铁的a及ε。(已知铁的相对原 子质量为55.85) 解：根据比耳定律 A =abc 得： a= A/bc =0.190/(2×5.0×10-4)=190 L·g-1·cm-1? ε = Ma =55.85×190=1.1×104 L·mol-1·cm-1 例2 ：已知某化合物的相对分子量为251，将此化合物 用已醇作溶剂配成浓度为0.150 m mol · L-1溶液，在 480nm处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8%，求该化 合物在上述条件下的摩尔吸光系数和吸光系数。 解：已知溶剂浓度c=0.150mmo l.L-1，b=2.00cm, T=0.398, 由Lambert-Beer定律得： ε480nm=A/ cb = -lg0.398/0.150×10-3 ×2.00 =1.33 ×103 ( L · mol-1 · cm-1) 由ε=aM , 得: a= ε/M a= ε /251=5.30(L · g-1 · cm-1) 2 不饱和烃 1) 非共轭不饱和烃 CH2=CH-(CH2)2-CH3 184 nm CH2=CH-(CH2)2-CH=CH2 185nm CH2=CH2 165 nm 烯烃 λmax 2) 共轭不饱和烃 CH2=CH-CH=CH-CH=CH2: λmax= 258nm 3) 羰基化合物 R带：n →π*跃迁，弱吸收 K带： π→π*跃迁，强吸收 R C=O Y R C=O Y K带: 红移 R带: 蓝移 R带: 270~300 nm K带: ~ 150nm Y= H, R Y= -NH2, -OH, -OR K带: 红移→220~260 nm R带: 红移→310~330 nm C=C C=O C=O = 基团结构 π→π* λmax(nm) n→π* λmax(nm) －C=O 166 280 －C=C－C=O 240 320 －C=C－C=C－C=O 270 350 245 435 4) 苯及其衍生物 苯π→π*跃迁的三个吸收带 E1带: 180 nm ε=47000 E2带: 204 nm ε=7000 B带: 250 nm ε=100 ?苯环上的取代基使 B带简化、红移，吸收强度增大。 苯 甲苯 苯胺 化合物 λmax(nm) (B带) εmax 苯 254 200 甲苯 261 300 间二甲苯 263 300 1,3,5-三甲苯 266 305 苯环与羰基双键 共轭 羰基双键： K带和R带红移； 苯环： B带简化，E2带与 K带重合且红移 乙酰苯的紫外吸收光谱 5) 稠环芳烃及杂环化合物 苯的三个吸收带红移，且强度增加。苯环的数目越多，波长红移越多。 第三节 紫外-可见分光光度计 一、基本组成 二、分光光度计的类型 仪器 紫外-可见分光光度计 一、基本组成 光源 单色器 样品室 检测器 显示 1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 2.单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 3.样品室 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 4.检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 5. 结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理。 二、分光光度计的类型 1.单光束 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 2.双光束