il22对角质形成细胞表达hbegf及tig3作用机制的研究-study on the mechanism of il22 on the expression of hb egf and tig 3 in keratinocytes.docx

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于必威体育官网网址，在年解密后适用本授权书。不必威体育官网网址□√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要银屑病是临床常见的慢性易复发的红斑、鳞屑性疾病。本病临床可分为寻常型、关节病型、红皮病型、脓疱型4个类型。病程慢性，反复发作。其发病机理尚未完全明确。目前研究认为银屑病的发病机制主要是由辅助性Th细胞及其相关细胞因子介导的以角质形成细胞为靶点的炎症反应。Th22细胞是新发现的CD4+辅助性T细胞亚群，在银屑病外周血中高表达，其主要细胞因子为IL-22。通过其实现相关生物学功能。在银屑病病人外周血及皮损中IL-22水平和银屑病的严重程度呈明显的正相关。我们的前期研究表明肝素结合表皮生长因子样生长因子(heparin-bindingepidermal-growth-factor-likegrowthfactor,HB-EGF)在银屑病表皮KC异常增殖和其转归中发挥重要作用。本课题的前期研究表明IL-22可以诱导体外培养HaCaT细胞表达HB-EGF，但作用机制未明，丝裂原活化蛋白激酶(MAPK-ERK1/2)通路和转录激活因子途径（JAK/STAT）这两种信号通路在银屑病发病机制中起不可或缺作用。他扎罗汀诱导基因3（Tazarotene-inducedgene3,TIG3）是一种肿瘤抑制因子。TIG3可以调节角质形成细胞的增殖和分化，在银屑病表达降低。综上所述，我们推测IL-22促KC分泌HB-EGF可能与MAPK-ERK1/2和JAK/STAT这两条信号通路有关，且与TIG3表达异常存在一定关系。IL-22通过促进HB-EGF表达，抑制TIG3表达参与银屑病发生、发展。本实验研究IL-22促HaCaT细胞分泌HB-EGF作用机制及对HaCaT细胞分泌TIG3的影响。目的：研究白介素22（Interleukin-22，IL-22）对角质形成细胞表达HB-EGF的作用机制和对TIG3表达影响及作用机制。方法：1、以不同浓度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和PBS作用于HaCaT细胞24小时后，提取细胞总蛋白，用Westernblot法检测IL-22对细胞MAPK-ERK1/2和JAK/STAT这两条信号通路的影响；应用相关信号通路阻断剂PD98059和AG490与IL-22作用于HaCaT细胞后分别提取干预后细胞总蛋白及总mRNA，用Westernblot法、ELISA法和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响。应用SPSS17.0统计软件进行统计学处理，P0.05认为有显著性差异。2、应用咪喹莫特诱导小鼠背部皮肤产生银屑病样皮损，然后皮损处皮下注射1μgIL-22，48h后处死小鼠，取下背部皮肤，HE染色观察小鼠皮肤的改变，免疫组I化观察HB-EGF的表达。3、用不同浓度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和应用相关信号通路阻断剂PD98059和AG490与IL-22处理HaCaT细胞，对照组用等量PBS处理，应用免疫荧光法检测细胞内TIG3蛋白的表达位置，分别提取干预后的细胞总蛋白及总mRNA，用Westernblot法、ELISA法和实时荧光定量RT-PCR法检测其对HaCaT细胞分泌TIG3的影响。应用SPSS17.0统计软件包进行统计学处理，P0.05认为有显著性差异。结果：1、IL-22可诱导HaCaT细胞MAPK信号通路中P-ERK1/2蛋白的增加和JAK2/STAT3信号通路中P-JAK2和P-STAT3蛋白的升高。加入信号通路特异性抑制剂PD98059及AG490后HB-EGF蛋白和mRNA的表达较IL-22干预组明显降低。2、咪喹莫特持续作用于BalB/c小鼠背部，可以成功诱导小鼠银屑病样皮损，IL-22皮下注射可引起正常BalB/c小鼠背部及银屑病小鼠皮肤表皮中HB-EGF表达的升高。3、IL-22可引起HaCaT细胞中TIG3蛋白水平的降低，其作用的强度与浓度有关：不同浓度IL