il18 tnfα对3t3l1脂肪细胞 raw264.7巨噬细胞慢性炎症作用的初步研究-preliminary study on the effect of il - 18 tnf α on chronic inflammation of 3t3l1 adipocytes raw 264.7 macrophages.docx

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2018-05-29 发布于上海
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il18 tnfα对3t3l1脂肪细胞 raw264.7巨噬细胞慢性炎症作用的初步研究-preliminary study on the effect of il - 18 tnf α on chronic inflammation of 3t3l1 adipocytes raw 264.7 macrophages.docx

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il18 tnfα对3t3l1脂肪细胞 raw264.7巨噬细胞慢性炎症作用的初步研究-preliminary study on the effect of il - 18 tnf α on chronic inflammation of 3t3l1 adipocytes raw 264.7 macrophages

IL-18、TNF-α对3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞慢性炎症作用的初步研究中文摘要研究目的：探讨白细胞介素18（interleukin18,IL-18）、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactoralpha,TNF-α）在脂肪组织慢性炎症中的作用，以初步探索IL-18炎症通路在脂肪细胞和巨噬细胞中的作用强度和可能的机制。研究方法：（1）CCK-8法检测IL-18对前脂肪细胞增殖的影响：设定不同浓度IL-18（0、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）干预3T3-L1前脂肪细胞12h后检测；（2）逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测IL-18、TNF-α对脂肪细胞脂联素（adiponectin）、PPARγ（peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma）和TLR-4（TOLL-likereceptor4）mRNA表达的影响：设定不同浓度IL-18、TNF-α（0、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）干预3T3-L1脂肪细胞48h后检测；（3）RT-PCR及蛋白印迹法（westernblot）检测IL-18、TNF-α对脂肪细胞、巨噬细胞IL-18Rβ（interleukin18receptorbeta）mRAN及蛋白的影响：设定不同浓度IL-18、TNF-α（0、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）干预3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞48h后检测；（4）酶联免疫吸附法（ELISA）检测IL-18对脂肪细胞、巨噬细胞分泌IL-6、TNF-α的影响：不同浓度IL-18（0、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）干预3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞48h后，吸取细胞培养液上清检测；（5）ELISA法检测TNF-α对脂肪细胞、巨噬细胞分泌IL-6、IL-18的影响：不同浓度TNF-α（0、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）干预3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞48h后，吸取细胞培养液上清检测。研究结果：第一部分结果：（1）与不加药的对照组相比，IL-18抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖，浓度升高至50ng/ml、100ng/ml时抑制作用明显，差异具有显著统计学意义（0.57±0.09vs0.45±0.03，0.41±0.04;P0.01）；（2）3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA的表达不受IL-18的影响，差异无统计学意义（P0.05）；低浓度TNF-α对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达无影响，差异无统计学意义（P0.05）；TNF-α浓度升高至10ng/ml、100ng/ml时,3T3-L1脂肪细胞的脂联素mRNA表达水平显著降低，差异具有显著统计学意义（1±0vs0.66±0.07,0.15±0.04，P0.01）；（3）3T3-L1脂肪细胞PPAR-γmRNA的表达不受IL-18的影响，差异无统计学意义（P0.05）；低浓度TNF-α对3T3-L1脂肪细胞PPAR-γmRNA表达无影响，差异无统计学意义（P0.05）；TNF-α浓度升高至10ng/ml、100ng/ml时,3T3-L1脂肪细胞的PPAR-γmRNA表达水平显著降低，差异具有显著统计学意义（1±0vs0.67±0.07,0.4±0.07，P0.01）；（4）3T3-L1脂肪细胞TLR-4mRNA的表达不受IL-18、TNF-α的影响，差异无统计学意义（P0.05）。第二部分结果：（1）3T3-L1脂肪细胞IL-18RβmRNA及蛋白的表达不受IL-18的影响，差异无统计学意义（P0.05）；低浓度TNF-α对3T3-L1脂肪细胞IL-18RβmRNA及蛋白的表达无明显影响，差异无统计学意义（P0.05）；TNF-α浓度升高至10ng/ml、100ng/ml时3T3-L1脂肪细胞的IL-18RβmRNA表达水平显著升高，差异具有显著统计学意义（1±0vs4.66±1.62,5.91±2.29；P0.01）；TNF-α浓度为10ng/ml、100ng/ml时3T3-L1脂肪细胞的IL-18Rβ蛋白表达水平显著升高，差异具有显著统计学意义（1±0vs4.40±1.54,5.87±1.98；P0.01）；（2）低浓度IL-18对RAW264.7巨噬细胞的IL-18RβmRNA及蛋白的表达无明显影响，差异无统计学意义（P0.05）；IL-18浓度升高至10ng/ml、100ng/ml时RA