id1 nfκb对cd133阳性细胞形成的影响-effects of id1 nf κ b on the formation of cd 133 positive cells.docx

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2018-05-29 发布于上海
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id1 nfκb对cd133阳性细胞形成的影响-effects of id1 nf κ b on the formation of cd 133 positive cells

目录英文简略词表??????????????????????1中文摘要????????????????????????2ABSTRACT????????????????????????3前言??????????????????????????5第一部分免疫印迹法检测Id1和NF-κB的蛋白表达1材料?????????????????????????92实验方法???????????????????????133结果?????????????????????????18第二部分流式细胞术检测CD133阳性细胞比例1材料?????????????????????????202实验方法???????????????????????223结果?????????????????????????23讨论??????????????????????????25结论??????????????????????????29参考文献????????????????????????30综述??????????????????????????36致谢??????????????????????????47缩略语表英文缩写英文全称中文全称Id1Inhibitorsofdifferentiation1分化抑制因子1NF-κBNuclearfactorkappaB核因子-κBFBSFetalbovineserum胎牛血清HRPHorseradishperoxIdase辣根过氧化物酶PVDFPolyvinylIdenefluorIde聚偏氟乙烯SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠PBSPhosphateBufferSaline磷酸盐缓冲液SDSSodiumdodecylsulfatepolyacrylamIdegelelectrophoresis十二烷基磺酸钠聚烯酰胺电泳TEMEDN,N,N’,N’-TetramethylethylenediamineN,N,N’,N’-四甲基乙二胺PMSFPhenylmethanesulfonylfluorIde苯甲基磺酰氟Minminute分钟FCMflowcytometry流式细胞仪GAPDHglyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase甘油醛-3-磷酸脱氢酶Id1、NF-κB对CD133阳性细胞形成的影响中文摘要目的：明确Id1、NF-KB对CD133表达的影响，及两者对CD133表达是否协同影响，为后续实验奠定基础，为探索胆脂瘤发病机制提供新的启示。方法：免疫印迹法分别观察各细胞系Id1、NF-κB蛋白的表达情况；利用流式细胞仪分别观察比较：Rhek-Id1细胞和Rhek-ev细胞CD133阳性细胞比例的差异，Rhek-P65细胞和Rhek-ev细胞CD133阳性细胞比例的差异，Rhek-IP细胞和Rhek-ev细胞CD133阳性细胞比例的差异。结果：（1）以GAPDH作为内参照，免疫印迹实验表明，Rhek-Id1细胞中Id1蛋白、Rhek-P65细胞中NF-κB(P65)蛋白、Rhek-IP细胞中Id1+NF-κB蛋白均稳定表达。（2）流式细胞仪分析Rhek细胞系、Rhek-ev细胞系、Rhek-Id1细胞系、Rhek-P65细胞系、Rhek-IP细胞系CD133阳性细胞比率（%）分别为（x?S）：55.47?0.68、50.85?0.58、66.80?0.80、70.14?1.17、67.74?1.13；统计分析显示，Rhek-Id1细胞系、Rhek-P65细胞系及Rhek-IP细胞系与Rhek-ev细胞系相比，P0.05，差异有统计学意义。可认为Rhek-Id1细胞系、Rhek-P65细胞系及Rhek-IP细胞系相比Rhek-ev细胞系，CD133阳性细胞比率均提高；Rhek-IP细胞系与Rhek-Id1细胞系相比，P?0.05，尚不能说明Id1和NF-κB能够协同对CD133的表达产生影响作用。结论：（1）Rhek-Id1细胞株、Rhek-P65细胞株、Rhek-IP细胞株均已分别稳定表达Id1蛋白、NF-κB蛋白、Id1蛋白和NF-κB蛋白。（2）Id1和NF-κB能够分别提高CD133的表达。关键词:分化抑制因子1（Id1）；核因子-κB(NF-κB)；CD133；中耳胆脂瘤Id1,NF-κBaffectontheCD133-positivecellformationAbstractObjective:ToestablishstabletransfectioncelllineRhek-Id1,Rhek-P65,andRhek-IP,bylentivirusvectorswhichcontainedId1,NF-κBandId1-NF-κBcompl