hsp27增强卵巢癌细胞对顺铂耐药的分析-analysis of hsp 27 enhancing cisplatin resistance in ovarian cancer cells.docx

第一部分HSP27增强卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究中文摘要目的：研究卵巢癌细胞系和组织中HSP27的表达与顺铂耐药和患者预后的关系，以及HSP27的作用机制。方法：western-blot和Real-timeRT-PCR检测卵巢癌细胞株OV2008、C13k、A2780、SKOV3、HO8910、CAOV3及si-C13K、NC组中HSP27mRNA和蛋白的表达水平；免疫组化方法检测101例上皮性浆液性卵巢癌病人的癌组织及10例正常卵巢组织中，HSP27的表达情况，并结合临床资料分析HSP27的表达和卵巢癌病人一线化疗耐药及无瘤生存时间的关系。在卵巢癌细胞系C13K细胞中采用RNA干扰技术，转染siRNA下调HSP27的表达，CCK-8法及流式细胞术检测并比较si组和NC组细胞对顺铂药物敏感性；细胞免疫组化检测si组和NC组细胞中caspase-3的表达。细胞免疫荧光检测P21的细胞定位和表达。结果：HSP27在C13K细胞中的表达水平显著高于其他5株细胞，差异有统计学意义（p0.05）；C13K细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）明显高于其他5株细胞系；HSP27在卵巢癌中表达较正常卵巢和良性肿瘤中明显增高；生存分析发现HSP27高表达组的中位PFS显著低于低表达组；下调HSP27的si-HSP27C13K细胞与对照组比较，HSP27蛋白水平明显受抑，顺铂处理后的凋亡率明显升高，P-Akt的含量也明显下降；免疫荧光结果显示si-HSP27组和应用PI3K抑制剂LY294002的细胞组中P21从细胞浆中转移至细胞核中。结论：HSP27在卵巢癌耐药细胞系中存在高表达现象。下调HSP27表达后，增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。HSP27促进AKT的磷酸化，抑制P21向细胞核内转移。关键词：HSP27；卵巢癌；顺铂；耐药TheeffectandmechanismofHSP27indrugresistanceofcisplatininoophoromacellsAbstractObjective:TostudytheHSP27proteinexpressionofovariancancercellsandtissuesandtherelationshipbetweenHSP27andtheDDPresistanceandprognosisofoophoromapatients.ToinvestigatethemechanismofHSP27indrugresistanceofcisplatininoophoromacells.Methods:Western-blotandReal-timeRT-PCRmethodswasusedtodetecttheexpressionofHSP27geneinovariancancercells.ImmunohistochemicalmethodswasusedtodetecttheexpressionofHSP27proteininoophoromatissuesfrom101casesofoophoromapatientsand10casesofnormalandbenighovariantissues.SiRNAweretransfectedintoC13K,detectedthedrugsensitivitybyCCK-8andflowcytometry.ImmunofluorescencewasusedtodetecttheexpressionofP21.Results:TheexpressionofHSP27proteininC13Kcellsweresignificantlyhigherthanthoseintheother5celllines(p0.05).TheIC50tocisplatinofC13Kwasobviouslyhigherthantheothercelllines.HSP27expressionwassignificantlyhigherinoophoromatissuethannormalovaries.ThepatientsinthehighexpressiongroupofHSP27hadalowermedianPFSthanthelowexpressiongroup.TransfectionthesiRNAofHSP27intoC13Kcells,resultthatC13KcellsapoptosisratesignificantlyincreasedthanNCcells,theHSP27andP-Aktproteinlevelswerereduce.ImmunofluorescenceresultsshowedthatP21transferredfromc