hoi02通过ros诱导食管癌细胞凋亡和g2m期阻滞的机制研究-mechanisms of hoi 02 inducing apoptosis and g2m arrest in esophageal cancer cells by ros.docx

步研究发现，HOI-02 诱导产生 ROS 继而导致细胞凋亡和 G2-M 期阻滞并最终抑制肿瘤细胞生长。数据显示，HOI-02 处理食管癌细胞 24h 可以导致近 60%的细 胞凋亡以及 G2-M 期阻滞，与细胞凋亡和细胞周期阻滞相关的通路 JNK/AP-1, Bcl2/caspase 3 和 ATM/p53-p21 被激活。同时，在体内实验人源性肿瘤组织异体 移植模型中，HOI-02 也能够明显的抑制肿瘤组织质量和体积的增长。体内外实 验表明，HOI-02 具有较好的抑制食管癌细胞和组织生长的能力。同时，HOI-02 作为 NO2 基团的化合物，和被替换为 NH2 基团的化合物 HOI-11 相比较之后，我 们发现 HOI-02 能够产生 ROS 并导致细胞凋亡和 G2-M 期阻滞并最终抑制肿瘤 细胞的生长，而 HOI-11 则不能对食管癌细胞产生效应。由此我们判断 NO2 基团 是产生 O2-的来源，这将为研发能够产生 ROS 的药物提供线索和依据。II第一章 HOI-02 能够抑制食管癌细胞的活性和锚定非依赖 性生长方法1.设计并合成化合物 HOI-02 和 HOI-11；2.利用 MS/MS 方法检测化合物 HOI-02 和 HOI-11 的纯度；3.MTS 法检测 HOI-02 和 HOI-11 对食管癌细胞活性的影响；4.利用软琼脂克隆形成实验检测 HOI-02 和 HOI-11 对食管癌细胞锚定非依赖 性生长的影响。结果1. 设计并合成了高纯度的化合物 HOI-02 和 HOI-112. HOI-02 能够剂量依赖性的抑制食管癌细胞的活性，而 HOI-11 对食管癌 细胞影响不大MTS 结果显示，HOI-02 处理食管癌细胞 KYSE30 和 KYSE510 后能够抑制 细胞活力，且呈浓度和时间梯度依赖。10μM 和 20μM HOI-02 处理 KYSE510 细 胞 48h，吸光度光谱 490nm 吸光值由 0.5534 分别降为 0.25(P0.01)和 0.093(P0.01)， 呈浓度梯度依赖。而 HOI-11 处理的食管癌细胞系 KYSE30 和 KYSE510 的细胞 活性状况则受影响较小。10μM 和 20μM HOI-11 处理 KYSE510 细胞 48h，吸光 度光谱 490nm 吸光值由 0.4114 分别降为 0.3972(P0.05)和 0.394(P0.05)。3. HOI-02 能够抑制食管癌细胞的锚定非依赖性生长，而 HOI-11 对食管癌 细胞影响不大软琼脂克隆形成实验结果显示，HOI-02 能够明显的抑制食管癌细胞 KYSE30， KYSE450 和 KYSE510 的锚定非依赖性生长。1μM HOI-02 对 KYSE510 即有明 显的抑制作用(P0.05)，5μM HOI-02 能够抑制 70%的 KYSE510 细胞的生长 (P0.01)，呈浓度梯度依赖。而食管癌细胞 KYSE30 和 KYSE510 的锚定非依赖 性生长情况则受 HOI-11 影响较小。10μM HOI-11 对食管癌细胞克隆形成没有明 显影响，仅仅 20μM HOI-11 时对细胞克隆形成有部分抑制作用。III第二章 HOI-02 能够诱导食管癌细胞凋亡和 G2-M 期阻滞方法1. 流式细胞仪检测 HOI-02 对食管癌细胞 KYSE510 凋亡和 G2-M 期阻滞的影响；2. 流式细胞仪检测 HOI-11 对食管癌细胞 KYSE510 凋亡和 G2-M 期阻滞的影响；3. TUNEL 法分析 HOI-02 对食管癌细胞 KYSE510 凋亡的影响。结果1. HOI-02 能够诱导食管癌细胞 KYSE510 凋亡和 G2-M 期阻滞 流式细胞仪结果显示，相比对照组，20μM HOI-02 处理食管癌细胞 KYSE51024h 能够诱导 48.24%的细胞凋亡（早期和晚期凋亡分别是 20.89%和 27.15%， P0.01）和 40.43%的 G2-M 期阻滞(P0.01)，并呈浓度梯度依赖。2. HOI-11 处理对食管癌细胞 KYSE510 凋亡和 G2-M 期阻滞的影响较小 流式细胞仪结果显示，HOI-11 处理食管癌细胞对凋亡和细胞周期阻滞影响不大。相比对照组，20μM HOI-11 处理细胞 KYSE510 24h 仅能够诱导 4.63%的 细胞凋亡和 2.11%的 G2-M 期阻滞。3. TUNEL 法表明 HOI-02 能够明显诱导食管癌细胞 KYSE510 凋亡TUNEL 分析结果显示，TUNEL 绿色荧光强度与 HOI-02 浓度呈剂量相关 性。相比对照组，5μM HOI-02 能够诱导部分细胞凋亡，TUNEL 绿色荧光强度 增加，20μM HOI-02 能够明显的诱导细