hsp27磷酸化在人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用-role of hsp 27 phosphorylation in apoptosis of human umbilical vein endothelial cells.docx

目录一、缩略词表……………………………………………………………3二、中文摘要……………………………………………………………4三、英文摘要……………………………………………………………5四、前言…………………………………………………………………7五、第一部分：HSP-27磷酸化在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用……………………………………………………………9引言…………………………………………………………………9材料和方法…………………………………………………………9结果…………………………………………………………………20讨论…………………………………………………………………24小结…………………………………………………………………26六、第二部分：高糖诱导的人脐静脉内皮细胞HSP-27磷酸化上游信号通路的研究…………………………………………………………27引言…………………………………………………………………27材料和方法…………………………………………………………27结果…………………………………………………………………29讨论…………………………………………………………………32小结…………………………………………………………………34七、结论…………………………………………………………………35八、参考文献……………………………………………………………36九、致谢…………………………………………………………………38十、综述…………………………………………………………………392缩略词表FBSfetalbovineserum胎牛血清HUVECMAPKHumanumbilicalveinendothelialmitogen-activatedproteinkinasecell人脐静脉内皮细胞丝裂原激活蛋白激酶ERKPI3Kextracellularsignal-regulatedkinasephosphoinositide3-kinase细胞外信号调节激酶磷脂酰激醇-3-激酶PDGF-BBERK1/2HSP-27AngIIPDGF-BBplatelet-derivedgrowthfactor-BBextracellular-signa1regulatedkinaseRoleofHeatShockProtein-27angiotensinIIplatelet-derivedgrowthfactor-BB血小板衍生生长因子-BB细胞外信号调节激酶1/2热休克蛋白-27血管紧张素II血小板衍生生长因子-BBVSMCsvascularsmoothmusclecells血管平滑肌细胞Akt/PKBproteinkinaseB蛋白激酶B3HSP27磷酸化在人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用摘要目的：研究热休克蛋白-27(HSP-27)磷酸化在高糖诱导的的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用；在此基础上，进一步研究HSP-27磷酸化与高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡相关的信号转道通路及其可能的机制。方法:取健康剖腹产孕妇的脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行培养，选择2~3代细胞进行实验。用特异性Phospho-HSP27抗体的蛋白免疫印迹法检测HSP-27的活性。采用Annexin-Ⅴ-PI染色流式细胞技术检测人脐静脉内皮细胞凋亡。结果：高糖呈时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞中HSP-27磷酸化，30.5mmol/L高糖作用细胞24、48、72h，HSP-27磷酸化水平较正常对照组分别提高了100%（P0．05），182.5%（P0．01），117%（P0．05）。而HSP-27选择性阻断剂槲皮素（10umol／L）作用48h可以抑制高糖诱导的HSP-27磷酸化，与高糖组相比槲皮素组HSP-27磷酸化水平降低了52.6%（P0.01），与此同时，可使凋亡增加，内皮细胞凋亡率较高糖组增高了37.6%（P0.01）。高糖诱导的HSP-27磷酸化可以被磷脂酰肌醇-3(phosphoinostide-3kinase,PI3K)选择性抑制剂LY294002和细胞外信号调节激酶1/2(extracellularsignalregulatedkinase1/2,ERK1/2)选择性抑制剂U0126分别成浓度依耐性抑制，与高糖组相比最大抑制率分别为62.6%and56.1%，与此同时，凋亡率上升，分别为50%,120.8%。结论：高糖可引起HSP-27磷酸化，HSP-27选择性阻断剂槲皮素可以抑制高糖诱导的HSP-27磷酸化，并可使内皮细胞凋亡更加明显，说明HSP-27磷酸化对高糖引起的细胞凋亡可能起着保护作用。PI3K/Akt和ERK1/2是高糖诱导的HSP-27磷酸化和细胞凋亡的重要途径。关键词：热休克蛋白-27高糖内皮细胞凋亡PI3K/AktERK1/24