hsamir133a对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其机制-influence of h samir 133a on invasion and migration of breast cancer cells and its mechanism.docx

英文缩略词表(Abbreviation)英文缩写英文全称中文全名Akt/PKBprotein kinase B蛋白激酶 BBSAbovine serum albumin牛血清白蛋白Ct 值threshold cycle number阈值循环数DEPCdiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯ERKextracellular regulated protein kinases细胞外信号调节蛋白激酶FBSfatal bovine serun胎牛血清Hsa-miRNAsHomo sapiens microRNAs人类微小核糖核酸HER-2Human epidermal growth factor receptor 2人表皮生长因子受体 2HER-3Human epidermal growth factor receptor 3人表皮生长因子受体 3hhour小时LRAluciferase reporter assay荧光素酶报告实验mRNAmessenger ribonucleic acid信使核糖核酸minminute分钟ODoptical density光密度值PBSphosphate buffer saline磷酸盐缓冲液Ppropability概率qRT-PCRquantitative real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction实时定量逆转录聚合酶链式反应RNAribonucleic acid核糖核酸ssecond秒siRNAsmall interfere RNA小干扰核糖核酸UTRuntranslated regions非翻译区Hsa-miR-133a对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其机制摘要背景和目的：微小 RNA (microRNA, miRNA) 是由长约 22 个核苷酸组成的非编码 蛋白 RNA，通过抑制靶 mRNA 的翻译或降解靶 mRNA 负性调节基因的表达，从 而参与生命过程中一系列的重要进程，包括生长发育、新陈代谢、细胞增殖、分 化及肿瘤形成。前期研究结果显示乳腺癌组织中 miR-133a 表达显著下调，并与淋 巴结转移呈负相关。本课题拟在此基础上进一步探讨 miR-133a 对人乳腺癌细胞侵 袭迁移的影响并阐明其作用机制。方法：(1) 用脂质体介导的转染方法将 miR-133a 模拟物 (miR-133a mimics)及 miR-133a 阻遏物 (miR-133a inhibitors)转染人乳腺癌细胞株 MCF-7，分别以 negative control (NC)和 inhibitor negative control (inhibitor NC)作为阴性对照。通过 MTS 细胞增殖 实验和 Transwell 侵袭实验检测细胞增殖能力和侵袭力；采用 Transwell 迁移实验 及划痕实验检测细胞迁移能力。(2) 利用生物信息学方法预测 miR-133a 的靶基因，并对其进行基因功能分析。(3) 选取侵袭、迁移及粘附相关预测靶基因为研究目标：① MCF-7 转染 miR-133a mimics 后，通过 qRT-PCR 及 western-blot 检测目标基因 mRNA 和蛋白表达。② 克 隆目标基因 FSCN1 3′UTR，将其与质粒 psiCHECK-2 (含荧光素酶报告基因)连接 后，与 miR-133a mimics 共转染 MCF-7，进行荧光素酶报告实验 (luciferase reporter assay, LRA)。结果：(1) MCF-7 细胞转染 miR-133a mimics 后 60h、84h、108h 和 132h (即细胞接种 24h、 48h、72h 和 96h)后，其增殖抑制率呈时间依赖性增加，依次为 0.8% (与 NC 组比 较，P0.05)、8.3%、8.8%和 18.7% (与 NC 组比较，均 P0.05)。而 miR-133a inhibitors组与 inhibitor NC 组间细胞增殖活性无显著性差异 (P0.05)。(2) Transwell 侵袭及迁移实验结果显示：与对照组比较，① 转染 miR-133a mimics 88h (即细胞接种 28h)后，MCF-7 细胞侵袭和迁移能力均显著降低，平均每低倍视 野 (×100)侵出小室的细胞数分别为 NC 组的 0.303 倍和 0.204 倍 (均 P0.01)；② 转染 miR-133a inhibitors 80h (即细胞接种 20h)后，MCF-7 细胞的侵袭和迁移能力 均显著增强，平均每低倍视野 (×100)侵出小室的细胞数分别为 inhibitor NC 组的 2.68 倍和 2.02 倍 (分别 P0.