hsamicrorna1385p靶向调控foxc1和vimentin抑制胰腺癌细胞增殖及侵袭转移-hsa microrna 1385 p targeted regulation fox c1 and vimentin inhibit proliferation and invasion and metastasis of pancreatic cancer cells.docx

Hsa-microRNA-138-5p 靶向调控 FOXC1 和 Vimentin 抑制胰 腺癌细胞增殖及侵袭转移专业：病理学与病理生理学博士研究生：喻 超导师：孙诚谊第一部分 Hsa-microRNA-138-5p 在胰腺癌中的表达及临床意义【摘要】目的： 筛 选 胰 腺 癌 及 对 应 癌 旁 组 织 中 差 异 表 达 的 microRNA(miRNA)，扩大样本数量，判断目标miRNA在胰腺癌组织、胰腺癌细 胞中的表达情况。方法：采用miRNA表达谱芯片分析3对胰腺癌及对应癌旁组织 中miRNA的差异性表达；实时定量PCR检测目标miRNA（hsa-miR-138-5p）在扩 大样本量的18对胰腺癌、对应癌旁组织及8株胰腺癌细胞、正常胰腺上皮细胞中 的表达情况；收集临床病例资料，分析miR-138-5p的表达水平与胰腺癌临床病理 特征之间的关系。结果：胰腺癌组织差异性表达miRNAs 80条，其中高表达68条、 低表达12条，其中miR-138-5p在3对胰腺癌中总体低表达，而对应癌旁组织高表 达，差异倍数3.64倍。扩大样本显示，miR-138-5p在胰腺癌组织中的表达比癌旁 低，差异有统计学意义（P0.05），其表达水平与胰腺癌病理分化程度及远处转 移发生率相关；miR-138-5p在8株胰腺癌细胞系中的表达分别比正常胰腺细胞低 1～10倍，且分化、增殖侵袭能力不同的胰腺癌细胞miR-138-5p表达水平也有所 差异。结论：miR-138-5p在原发性胰腺癌组织及胰腺癌细胞系中呈低表达水平， 与胰腺癌病理分化程度及远处转移发生率相关。【关键词】胰腺癌；基因芯片；微小RNA第二部分 Hsa-microRNA-138-5p 对胰腺癌细胞增殖能力的影响【摘要】目的：探讨miRNA-138-5p对胰腺癌细胞体内、外增殖能力的影响。 方法：构建miR-138-5p过表达慢病毒载体、抑制载体，感染胰腺癌细胞株，实时 定量PCR检测感染效率；CCK-8、平板克隆形成实验、EdU细胞增殖法检测 miR-138-5p对胰腺癌细胞增殖的影响；流式细胞术检测miR-138-5p对胰腺癌细胞 周期的影响；构建裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，检测miR-138-5p对胰腺癌细胞裸 鼠皮下成瘤能力的影响。结果：成功构建miR-138-5p慢病毒载体，CCK-8、平板 克隆实验、EdU细胞增殖实验结果显示，上调胰腺癌细胞miR-138-5p表达可显著II降低胰腺癌细胞株增殖能力、下调miR-138-5p表达后胰腺癌细胞的增殖能力明显加强，相对于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；FCM结果显示，上 调胰腺癌细胞miR-138-5p表达可阻滞细胞周期于G0/G1期；裸鼠皮下成瘤实验显 示，miR-138-5p可抑制胰腺癌细胞皮下成瘤能力。结论：miR-138-5p 对胰腺癌 细胞增殖具有明显的抑制作用，抑制胰腺癌细胞裸鼠皮下成瘤能力，其作用至少 部分是通过阻滞细胞于 G0/G1 期而实现的。【关键词】胰腺癌；miR-138-5p；增殖；皮下成瘤第三部分 Hsa-microRNA-138-5p 对胰腺癌细胞侵袭性和化疗敏感 性的影响【摘要】目的：探讨miR-138-5p对胰腺癌细胞体、内外侵袭转移能力和化疗 敏感性的影响。方法：细胞划痕实验检测miR-138-5p对胰腺癌细胞迁移能力的影 响；Transwell小室侵袭实验检测miR-138-5p对胰腺癌细胞侵袭能力的影响；选择 胰腺癌临床常用化疗药物（吉西他滨和5-氟尿嘧啶），CCK-8检测miR-138-5p对 胰腺癌细胞化疗敏感性的影响；构建裸鼠胰腺癌肝转移模型，检测miR-138-5p 对胰腺癌细胞在动物体内侵袭转移能力的影响。结果：上调miR-138-5p表达可显 著降低胰腺癌细胞株迁移和侵袭转移能力、下调miR-138-5p表达后胰腺癌细胞的 迁移和侵袭转移能力下降，相对于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）； miR-138-5p可增加胰腺癌细胞对5-氟尿嘧啶的化疗敏感性，其24h、48h及72h实 验组IC50值较阴性对照组差异均具有统计学意义（P＜0.05)；裸鼠胰腺癌肝脏转 移模型显示，miR-138-5p可抑制胰腺癌PANC-1细胞在肝脏微转移灶的形成，相 对于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：miR-138-5p能降低胰 腺癌细胞的侵袭及转移能力，增加胰腺癌细胞对5-氟尿嘧啶的化疗敏感性，减少 裸鼠体内胰腺癌肝转移模型中肝脏远处微转移灶的形成。【关键词】胰腺癌；miR-138-5p；侵袭与转移；化疗敏感性第四部Hsa-microRNA-138-5p 的靶基因鉴定及其调控人胰腺癌 细胞增殖、侵袭转移的机制【摘要】目的：明确miR-138-5p抑制胰