登革热检测规程p5.docxVIP

登革热 （一）登革病毒感染与机体免疫反应? 　　?登革病毒感染后，潜伏期为3～14天，通常4～7天，潜伏期内采集的患者标本尚不能检出登革病毒或相应的机体免疫反应。发病后，病毒在血液中存在的时间（病毒血症期）约为7天，病毒NS1抗原在血液存在的时间略长。发病后4～5天内，可在病人的血清、血浆、白细胞、脑脊液和尸检组织标本中分离到病毒，病毒核酸及NS1抗原在这个时期的检出率高。病人血液中抗体水平，因个体免疫状态不同而具有显著差异。若以前没有感染过登革病毒或其他黄病毒，或接种过黄病毒疫苗（如：乙脑、黄热等），病人首次感染抗体免疫反应呈现为特异性抗体水平缓慢升高，IgM抗体出现最早，随后出现的是IgA和IgG抗体。在发病后3～5天的患者中IgM抗体检出率约为50%，发病后第5天的患者中检出率约为80%，而在发病后第10天患者中，约99%的患者可检出。IgM抗体水平在发病后2周达高峰，然后逐步下降，可保持2～3个月。IgA抗体出现略晚于IgM抗体，可保持约45天。在发病一周后，可在血液标本中检出较低滴度的IgG抗体，之后抗体滴度缓慢升高，可持续存在多月甚至终生。如果病人属于再次感染登革病毒（登革病毒感染者以前曾感染过登革病毒，有时可能是曾接种其他黄病毒疫苗或感染过其他黄病毒），抗体滴度可快速升高并可和多种黄病毒产生反应。主要为高水平的IgG抗体，在急性期即可检出，可持续存在10个月以上，甚至终生。IgA抗体也可在急性期标本中检出。再次感染登革病毒的病人恢复期早期的IgM抗体滴度明显低于首次感染，甚至无法检出，通过计算IgM/IgG抗体比例，可以区分首次或再次登革病毒感染。IgA抗体检测试剂在临床诊断中的应用尚处于评价阶段。? 登革病毒IgM/IgG抗体检测规程 【方法】 胶体金法 【预期用途】 登革热（Dengue Fever）是 一种由登革病毒引起的急性传染病，主要流行于热带和亚热带国家和地区。登革病毒为单股正链RNA病毒，在分类学上属于黄病毒科，黄病毒属（flavivirus）。病毒核心为RNA与蛋白质组成的20面立体对称的病毒颗粒，外层为两种糖蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特异性抗原。病毒基因编码3个结构蛋白（核衣壳蛋白C，膜蛋白M，包膜蛋白E）和7个非结构蛋白（NS1,NS2a,NS2b,NS3,NS4a,NS4b,NS5）。登革病毒感染可导致机体产生免疫应答，并产生病毒特异性的抗体。初次感染者，发病后3－5天可在血液中检出病毒IgM抗体，发病2周后达到高峰，可维持2－3个月，发病1周后可检出病毒IgG抗体，IgG抗体可维持数年甚至终生。检测临床登革热症状的病人样本中登革病毒抗体，有助于登革热的辅助诊断。 【检验原理】 采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维上预包被胶体金标记的登革病毒抗原（Au-Dengue-Ag）和羊IgG(Au-羊IgG)，在硝酸纤维素膜上IgG检测线，IgM检测线和对照线处分别包被鼠抗人IgG单克隆抗体，鼠抗人IgM单克隆抗体和鼠抗羊IgG单克隆抗体。检测阳性标本时，样本中登革热病毒IgG抗体（或IgM抗体）与Au-Dengue-Ag结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过IgG检测线（或IgM检测线）时与预包被的鼠抗人IgG单抗（或鼠抗人IgM单抗）形成“Au-Dengue-Ag－Dengue病毒抗体－鼠抗人IgG单抗（或鼠抗人IgM单抗）－固相材料”夹心物而富集显色，胶体金标记羊IgG则在对照线与鼠抗羊IgG单克隆抗体结合富集显色，阴性标本则仅在对照线处显色。 【试剂组成成分】 1，登革病毒IgM/IgG抗体试剂 检测线：鼠抗人IgM抗体、鼠抗人IgG抗体 对照线：鼠抗羊IgG抗体 结合垫：胶体金标记登革病毒抗原和胶体金标记羊IgG 2，梓品稀释液 3，2uL吸管 【样本要求】 检测样本为血清或血浆，避免溶血。 血浆可用肝素、柠檬酸钠或EDTA抗凝。 采集后的标本及时检测，2－8C密封保存7天，长期保存需冷冻-20C，忌反复冻融。 【检验方法】 检测前先将冷藏的试剂和待测样本恢复至室温 处理好样本，取出试剂检测卡，水平放置并作好标记。 用移液器吸取样本2uL，或以试剂配置吸管吸取样本至2uL刻线，滴加在检测卡样本孔（S1孔）。 在检测卡稀释液孔（S孔）滴加2滴（70-100uL）样品稀释液。 20分钟同观察记录结果。 【结果报告】 阳性： 质控线（C）和检测线（G）、检测线（M）都出现紫红色条带，表示样品中含有登革病毒IgM/IgG抗体。 质控线（C）和检测线（G）都出现紫红色条带，表示样品中含有登革病毒IgG抗体。 质控线（C）和检测线（M）都出现紫红色条带，表示样品中含有登革病毒IgM抗体。