2009.NO实验课件.pptVIP

一氧化氮 Nitric oxide NO 一、概述 一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种结构简单 的气体 具有一个不配对电子, 化学性质活泼，半衰期极短（1~5s） N O NO作为生物信使的发现,最早是从外周开始的. 1980年Furchgott和Zawadzki报道： Ach、缓激肽和ATP等的舒血管作用 是由 血管内皮细胞释放的内皮细胞源性血管舒张 因子所介导(endothelium-derived relaxing factor,EDRF) EDRF半衰期很短（4～6s),其作用能被血红 蛋白和美蓝抑制 1986年Furchgott基于EDRF与NO药理作用的 相似性,如 都能引起血管条短暂的舒张, 抑制血小板聚集， 使积聚的血小板解聚， 并抑制血小板的粘附作用等。 提出：EDRF可能就是NO 一些硝基类血管扩张药（硝基甘油、硝普钠） 松弛血管平滑肌的介质，实质 NO 作为在体内发现的第一个气体性细胞内及 细胞间信使分子, NO参与 神经系统， 免疫系统、 心血管系统、 消化系统及 生殖系统 等生理功能作用 特别在中枢神经系统,生理条件下NO: 可调节 脑血流量 导向轴突生长 促进递质释放 参与突触可塑; 在 长时程增强, 长时程抑制 学习和记忆, 颇受重视 痛觉调制 阿片成瘾 NO:产生过量 病理性刺激时 神经毒性 一氧化氮测定法 概述 由于NO为气体生物活性物质,半衰期极短,组织 含量很低 很难直接检测 NO在体内可被代谢 超氧化物阴离子(O2-) 氧化生成 亚硝酸根(NO2-) 以生成NO2-为主,该 硝酸盐根(NO3-) 代谢产物稳定,主要从 尿中排出,易检测. 测定尿中NO2-含量可间接反映机体内NO代谢水平 NO分光光度测定法 镉还原法 一, 原理:硝酸盐通过镉被还原为亚硝酸盐(NO2-), 亚硝酸盐在碱性条件下(低温:0-5℃)和磺胺 作用生成重氮化合物(重氮盐),再与N-1-萘 基乙二胺盐酸进行偶联反应(保留氮反应), 生成有颜色的化合物, 通过分光光度法比 色,在波长546nM下测定光密度,并制作标准 曲线,通过曲线可求得样品中NO含量. 二,实验试剂: 1、亚硝酸钠标准液的配制 ①、标准储存液： 0.1M NaNO2标准储存液,用10mM的四硼酸钠 溶解,在室温（或4℃冰箱),可至少储存九个月 ②、工作标准液: 由储存液新鲜稀释,配制,一般可使用三天. 工作标准液可根据样品含量的高低作不同浓度 的稀释.本实验工作标准液为80uM,依次向低浓 度作等倍稀释 2、0.05M 磷酸缓冲液 配制 0.5M Na2HPO4 100ml ① 0.5M NaH2PO4 100ml ② 取①液80ml 混合加水至1000ml, ②液20ml 即为0.05M PBS 3、55mM NaOH溶液