cyslt1基因敲除小鼠模型和h99gfp菌株的制备以及cyslt1受体在小鼠脑微血管和海马中的分布word格式论文.docxVIP

目录英文缩略词表1中文摘要2Abstract3第一章前言5第二章材料与方法7第三章实验结果26第四章讨论37总结40参考文献41致谢44英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称BBBBloodBrainBarrier血脑屏障bpbasepair碱基对CNSCentralnervoussystem中枢神经系统cPLA2αCytosolicphospholipaseA2α胞浆型磷脂酶A2α CysLTsCysteinylLeukotrienes半胱氨酰白三烯CysLT1受体CysteinylLeukotriene receptor1 半胱氨酰白三烯1 型受体CysLT2受体CysteinylLeukotriene receptor2 半胱氨酰白三烯2 型受体ddH2ODouble-distilled water 双蒸水dddH2OTriple-distilled water三蒸水DNaseDeoxyribonuclease脱氧核糖核酸酶DNAdeoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸E.coliescherichiacoli大肠杆菌ESembryonicstemcell胚胎干细胞GFPGreenFluorescent Protein绿色荧光蛋白hhour小时minminute分钟PBSphosphatebufferedsaline磷酸缓冲盐溶液液PCRpolymerase chainreaction聚合酶链反应PKCProteinKinaseC蛋白激酶CRNaseribonuclease核糖核酸酶secsecond秒钟rpmrevolutions perminute每分钟转速三羟甲基氨基甲烷－TBEtris－borateEDTA硼酸－乙二胺四乙酸5-LO5-Lipoxygenase5-脂氧合酶1CysLT1基因敲除小鼠模型和H99-GFP 菌株的制备及CysLT1受体在小鼠脑微血管和海马中的分布研究生：陈清汾导师：朱龙坤中文摘要目的：1、制备CysLT1基因敲除小鼠模型及H99-GFP菌株；2、研究小鼠感染隐球菌H99 后CysLT1受体在脑微血管及海马中的表达。方法：1、采用PCR，RT-PCR及Western-blot检测鉴定CysLT1基因敲除小鼠；2、基因枪轰击技术制备H99-GFP隐球菌菌株；3、采用小鼠气管接种新生隐球菌H99 建立实验性小鼠脑膜炎模型；4、免疫组化及免疫荧光方法检测CysLT1受体在脑组织中的表达。结果：1、本实验室构建的CysLT1基因敲除小鼠经在核酸及蛋白水平上检测鉴定，均不表达CysLT1受体；2、带有GFP的质粒通过基因枪轰击可整合入H99基因组内，筛选出的H99菌株可高水平稳定表达GFP；3、接种隐球菌后的野生型小鼠与假手术组小鼠相比，CysLT1受体在大脑皮层和海马神经元细胞中的表达明显增加，尤其在脑微血管中的表达显著升高。结论:1、成功制备CysLT1基因敲除小鼠模型及H99-GFP菌株，为探讨CysLT1受体在隐球菌H99 侵入脑微血管的作用提供了有效的研究工具2、首次发现小鼠感染隐球菌后脑微血管内皮细胞CysLT1受体显著表达，脑皮层和海马神经元细胞CysLT1受体的表达也明显增加，上述研究为后续相关课题的开展打下了重要基础。【关键词】CysLT1基因基因敲除新生隐球菌脑微血管内皮细胞2ThegenerationofCysLT1geneknockoutmiceandH99-GFPstrainandthestudyofCysLT1receptordistributionincerebralmicrovesselandhippocampus ofmicePostgraduate：ChenQingfenSupervisor：ZhuLongkunAbstractAim:togenerateCysLT1R-deficient miceandH99-GFPstrain.tostudythe expressionofCysLT1receptorincerebralmicrovasculature and hippocampus ofmiceinfectedwithCryptococcusneoformans.H99.Methods:CysLT1gene-disrupted miceweredetectedbyPCR,RT-PCRand Western-blot.GFPplasmidswereintegratedintothegenomeoftheH99byaBioRadPDS-1000/He biolistic particledeliverysystem.Mice modelofexperimentalmeningi