cyclinacdk2介导bag3 ser291位点的磷酸化并影响胃癌细胞的增殖和凋亡word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 英文缩略词表 英文缩略 英文全称 中文全称 BAG3 Bcl2-associated athanogene 3 Bcl2 相关永生化基因 3 CyclinA CyclinA 细胞周期蛋白 A 细胞周期蛋白依赖性激 CDK2 Cyclin-dependent kinase2 Forkhead transcription factors of the FOXO1 Oclass1  酶 2 叉样转录蛋白 DMEM Dulbeccos modified Eagles medium 达尔伯克改良的伊格尔 RPMI-1640 Roswell Park Memorial Institute RPMI-1640 培养基 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 PVDF Polyvinylidene difluoride 聚偏氟乙烯 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 BSA Bovine Serum Albumin 牛血清白蛋白 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 g（rcf） relative centrifugal force 相对离心力 h hour 小时 min minute 分钟 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 Ep Eppendorf tube 离心管 OD Optical Density 光密度 统计产品与服务解决方 SPSS Statistical Product and Service Solution 案 ddH2O double distilled H2O 双蒸水 WB Western Blot 蛋白免疫印迹试验 链 霉 菌 抗 生 物 素 蛋 白 - SP Streptavidin-Peroxidase 过氧化酶 IHC Immunohistochemistry 免疫组织化学 DAB 3-3`diaminobenzidine 3-3`二氨基联苯胺 目 录 1.附录………………………………………………….……….….…….…2 2.中文摘要……………………………………………….…….……….….4 3.英文摘要……………………………………………….……….….….…5 4.前言……………………………………………………….……..………7 5.材料和方法…………………………………...……….…………….….11 6.结果…………………………..……………………….………………...22 7.讨论……………………………………………..……….……………...37 8.结论………………………………………………..….………………...43 9.参考文献……………………………………………...………………...44 10.附图…………………………………..….……..……….……………..48 11.综述…………………………...………….…………………………50 12.致谢…………………………...………………….……………………58 CyclinA/CDK2介导BAG3 Ser291位点的磷酸化并影响 胃癌细胞的增殖和凋亡 【摘要】 目的 明确 CyclinA，CDK2，BAG3 在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况及相关性， 探讨 BAG3 表达与胃癌患者临床病理特征的关系，初步研究 BAG3 及其 S291 位点 磷酸化对于胃癌细胞增殖及抗凋亡能力的影响。 方法 收集福建医科大学附属协和医院胃外科 2012 年 12 月-2013 年 07 月期间 手术切除的 180 例新鲜胃癌组织及其癌旁组织，采用 Western blot 法检测 CyclinA，CDK2，BAG3 的蛋白质表达情况；利用半定量免疫印迹实验的灰度分析 和统计学方法分析 CyclinA，CDK2，BAG3 之间的相关性及 BAG3 与胃癌患者临 床病理特征的关系；通过构建 BAG3 过表达及沉默质粒： BAG3-WT ， BAG3-S291A， BAG3-S291D; BAG3-shRNA。采用瞬时转染的方法将各个质粒转 染入胃癌细胞株 MGC-803 内，分别用 Neomycin 和 Puromycin 筛选出过表达及沉 默表达 BAG3 基因的稳定转染胃癌细胞株。通过 CCK8 和平板克隆形成实验检测 细胞增殖，通过流式细胞仪及 WB 检测 c-PARP 分析细胞凋亡，通过荧光素酶实验 检测 FOXO1 转录活性的改变，通过细胞免疫荧光及核质分离检测 FOXO1 的细胞 内定位变化。 结果 1. BAG3 在胃癌组织、癌旁组织中均有表达，其主要定位在细胞质。与癌旁 组 织 相 比 ， BAG3 在 胃