cyclophilin a结合caveolin审审1降低大鼠血管平滑肌细胞胆固醇蓄积word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 Cyclophilin A 结合 Caveolin-1 抑制大鼠血管平 滑肌细胞胆固醇蓄积 研 究 生：郭琰 指导教师：廖端芳 教授 庹勤慧 副教授 摘 要 目的：通过 Ox-LDL 诱导的血管平滑肌细胞荷脂模型，观察胆固醇转运复合物中关键 蛋白 cyclophilin A 和 caveolin-1 在细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积 的关系，进而分析这两种蛋白在血管平滑肌源性荷脂细胞形成过程中的作用。 方法：实验采用75mg/L Ox-LDL 与血管平滑肌细胞共同孵育不同的时间(0，24，48， 72h)，建立平滑肌细胞荷脂模型；Western-blot、免疫荧光法分别定量，定位检测cyclophihn A和caveolin-1蛋白的表达改变；油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况；高效液相色谱 法检测细胞内外胆固醇含量变化，免疫共沉淀检测cyclophilin A和caveolin-1相互作用。 结果：75mg/L Ox-LDL 与血管平滑肌细胞共同孵育24，48，72小时后，与未处理组比 ??，cyclophilin A的蛋白表达逐渐减弱，同时，胆固醇转运复合物中另一关键蛋白 caveolin-1的表达也逐渐降低，差异均有显著性（P0.05）。间接免疫荧光定位检测发现 Ox-LDL 显著抑制平滑肌细胞中cyclophilin A与caveolin-1在胞膜、胞浆中的表达，且随 着处理时间的延长，作用更明显。油红O染色显示在Ox-LDL 处理细胞48小时后，细胞 内有大量脂滴的形成，高效液相检测分析细胞内总胆固醇含量不断增加，细胞外胆固醇 总含量随着Ox-LDL 处理24、48、72小时依次下降。并且cyclosporin A抑制cyclophilin A 活性后能增加细胞内总胆固醇量和降低细胞外胆固醇总量。免疫共沉淀结果显示 cyclophilin A和caveolin-1在大鼠血管平滑肌细胞中能够结合，而cyclosporin A能降低 cyclophilin A与caveolin-1的结合能力。 结论： 1． Ox-LDL 可能通过下调 cyclophilin A 与 caveolin-1 的表达促进血管平滑 肌细胞内胆固醇蓄积。 2． 抑制 cyclophilin A 活性可降低 cyclophilin A 与 caveolin-1 的相互作用， 并促进细胞内的胆固醇蓄积。 3． cyclophilin A 与 caveolin-1 的相互作用，可能是调节血管平滑肌细胞内 胆固醇稳定的重要机制。 关键词：cyclophilin A；血管平滑肌细胞；胆固醇；caveolin-1；cyclosporin A Cyclophilin A inhibits cholesterol accumulation via the caveolin-1 bonding-dependent pathway in vascular smooth muscle cells ABSTRACT Backgroud：Epidemiological studies have shown the intracellular decrease of cholesterol or amount reduction of foam cells could reverse angiosclerosis. Cycolphilin A and caveolin-1 as the key proteins participate in cholesterol efflux in foam cells. But the function of these proteins in vascular smooth cells (VSMCs) are still not clear. Objective: To observe the protein expression and function of cyclophilin A and caveolin-1 in lipid-loaded VSMCs induced by oxidized low density lipoprotein and to investigate their effect on cellular cholesterol accumulation. Methods: VSMCs were treated with 75mg/L Ox-LDL for different time (0,24,48, 72h).Western-blot and immunofiuoerscence were used to detect protein expres