bcgppd对γδt细胞杀伤肺癌a549细胞作用的影响word格式论文.docxVIP

英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称BCG-PPDPurifiedProtein Derivativeof BCG卡介菌纯蛋白衍生物γδTcellsGammadeltaTcellsγδT细胞CTLCytotoxic lymphocyte细胞毒性T淋巴细胞NKNatural KillerCell自然杀伤细胞PBMCPeripheralBlood Mononuclear Cell外周血单个核细胞ZAZoledronicacid唑来膦酸盐IL-2Interleukin-2白细胞介素-2E：TEffector:target效靶比例LDHLactatedehydrogenase乳酸脱氢酶FCMFlow Cytometry流式细胞术TEMTransmission Electron Microscope透射电子显微镜MinMinute分钟HHour小时DDay天PBSPhosphate buffer solution磷酸盐缓冲液PFNPerforin穿孔素GRAGranzyme颗粒酶TCRTcell receptorT细胞抗原受体MHCMajorHistocompatibilityComplex主要组织相容性复合体MICAMajorhistocompatibilitycomplexclass IrelatedgeneA主要组织相容性复合体I类相关基因AAPCAntigen-presentingcell抗原提呈细胞HSPHeat Shock Proteins热休克蛋白IPPIsopentenyl pyrophosphate异戊烯焦磷酸1FasFactorassociated suicide凋亡相关因子FasLFactorassociated suicideligend凋亡相关因子配体TRAILRTNF-related apoptosis-inducing ligand receptor肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸BCGBacillus Calmette-Guerin vaccine卡介苗PPDPurifiedProteinDerivativeof结核菌素纯蛋白衍生物TuberculinESAT-6Earlysecretedantigenictarget-6早期分泌靶抗原IFN-γInterferon-gamma干扰素-γTNF-αTumor necrosis factor-alpha肿瘤坏死因子-α2BCG-PPD对γδT细胞杀伤肺癌A549细胞作用的影响摘要目的：研究卡介菌纯蛋白衍生物（PurifiedProteinDerivativeof BCG,BCG-PPD）对人外周血γδT细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响，并进一步探讨BCG-PPD对γδT细胞杀伤肺癌A549细胞的增效作用。方法：（1）制备γδT细胞：采用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC），以唑来膦酸(Zoledronic acid, ZA,终浓度为5nmol/ml)及白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2,终浓度为200IU/ml)刺激扩增γδT细胞；（2）确定最佳效靶比例：培养9-14 天后，用流式细胞仪测定PBMC中γδT细胞的比例。按不同的效靶比例（Effector:target,E:T）将γδT细胞与肺癌A549 细胞混合培养，48小时后用倒置显微镜观察肺癌A549 细胞的生长状态，并使用乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase, LDH）细胞毒性检测试剂盒检测γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性，以确定最佳效靶比例。（3）BCG-PPD处理后相关指标检测：将γδT细胞与肺癌A549细胞按最佳效靶比例混合培养，并加入不同浓度的BCG-PPD处理，用倒置显微镜动态观察细胞的生长状况，48 小时后使用LDH细胞毒性检测试剂盒检测γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性，使用流式细胞仪检3测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B的表达，并用透射电镜观察肺癌A549细胞的形态结构变化。结果：（1）体外刺激扩增9-14 天后γδT 细胞浓度从初始的（4.65±4.36）%增加到（83.82±2.18）%。（2）按不同效靶比例混合培养γδT细胞与肺癌A549细胞时，倒置显微镜下可观察到肺癌A549细胞生长状况的差异，γδT细胞的细胞毒性作用随效靶比例的升高而增强，最佳效靶比为20:1。（3）按20:1的效靶比例混合培养，并加入不同浓度的BCG-PPD 处理后，流式细胞仪检测加入浓度为20IU/ml 的BCG-PPD 处理组γδT 细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性最强，穿孔素、颗粒酶B的表达均显著高于未加入BC