amd3100对受sdf1cxcr4趋化的神经干细胞在脑缺血大鼠神经损伤修复中的影响word格式论文.docxVIP

中英文缩略词表英文缩写NSCs英文全称Neural stem cells中文全称神经干细胞MCAO PBSDAPImiddlecerebral artery occlusion Phosphate buffer saline4,6-diamidino-2-phenylindole大脑中动脉阻塞磷酸盐缓冲液4,6-二乙酰基-2-苯基吲哚BrdU SDF-1 CXCR4vWFAMD31005-Bromo-2’-Deoxyuridine stromalcell-derivedfactor-1 CXC chemoldne receptor 4 von Willebrand factorCXCR4 specific receptor blockers5-溴脱氧核苷基质细胞衍生因子-1CXC 趋化因子受体 4血管性因子CXCR4 的特异性受体阻断剂TUNELterminal dexynucleotidyl transferase-mediated 末端脱氧核苷酸转移dUTP nick end labeling酶介导 dUTP 缺口末端标记测定法NGFNerve growth factor神经生长因子bGFGBasic fibroblast growth factor碱性成纤维生长因子ODOptical density光密度SVZ SGZsubventricular zone the subgranular zone室管膜下区 海马颗粒层AMD3100 对受 SDF-1/CXCR4 趋化的神经干细胞在脑缺血大鼠神经损伤修复中的影响中文摘要目的 证实移植的神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）是在 SDF-1/CXCR4 轴 的迁移下到达脑缺血损伤区；验证 CXC 趋化因子受体 4(CXC chemoldne receptor 4 ,CXCR4)的特异性受体阻断剂 AMD3100 能够阻断神经干细胞的迁移，还对脑 缺血大鼠的神经损伤修复造成影响并进一步探究其影响神经功能恢的可能机理。方法分离、培养胎鼠来源的神经干细胞，并用 BrdU 标记神经干细胞；制备大 鼠大脑中动脉栓塞模型（middlecerebral artery occlusion，MCAO），随机分为三 组： NSCs 移植组、NSCs-AMD3100 移植组和 PBS 移植组。在体外实验中，将 神经干细胞悬液加到 Transwell 小室的上室,在下室中分别加入 50、100 和 200ng/mL 的 SDF-1，观察不同浓度的 SDF-1 对神经干细胞的迁移作用，在阻 断试验中将神经干细胞预先与 AMD3100 混合 30 分钟。Transwell 小室置于孵箱 中孵育后，膜固定及考马斯亮蓝染色。光学显微镜下观察并计数。在体内试验中， 在制备大鼠大脑中动脉栓塞模型 24 小时后，分别通过尾静脉移植 NSCs 和等量 的 PBS，部分移植 NSCs 组同时腹腔注射 AMD3100。移植神经干细胞 2 周后分 别对三组大鼠进行改良的神经功能学评分（Modified Neurological Severity Score， mNSS），并处死大鼠，对三组大鼠进行冰冻切片，并免疫组织化学染色（SDF-1， BrdU，vWF，TUNEL）。观察 SDF-1 在缺血脑组织的表达情况及与移植的神经 干细胞的定位关系；计数 NSCs-AMD3100 移植组和 NSCs 移植组脑组织梗死边 缘区标记的神经干细胞的数量；计数 NSCs 移植组和 NSCs-AMD3100 移植组脑 组织梗死边缘区 vWF，TUNEL 阳性细胞的数量。结果SDF-1/CXCR4 能够诱导 NSCs 的迁移：体外试验中，SDF-1 对 NSCs 有浓度趋化作用，在 100ng/mL 时达到最大的效应,且明显的被 CXCR4 受体阻断剂 AMD3100 阻断；体内试验中，SDF-1 在缺血大鼠中高表达，且移植的神经干细 胞聚集在 SDF-1 高 表 达 区 。 到 达 脑 缺 血 梗 死 区 的 神 经 干 细 胞 的 数 量 NSCs-AMD3100 移植组明显比 NSCs 移植组少，且差异有统计学意义（p0.05）。 AMD3100 对神经干细胞治疗脑缺血有影响： NSCs-AMD3100 组和 NSCs 移植 组相比在 2w 时神经功能评分高，且差异有统计学意义（P0.05）；NSCs-AMD3100 组脑梗死边缘区血管（vWF）数量比 NSCs 移植组少；细胞凋亡数目（TUNEL） 比 NSCs 移植组多，且差异都有统计学意义 (P0.05)。结论 移植的神经干细胞在 SDF-1/CXCR4 的趋化下到达脑缺血区参与神经修复 的; AMD3100 能够阻断神经干细胞的迁移，对脑缺血大