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Ambra1介导的自噬与凋亡在结肠癌细胞中的研究中文摘要目的：Ambra1 是一个与自噬相关的重要基因，越来越多的研究揭示了Ambra1 可以通过促进自噬从而发挥的促生存的作用。在Ambra1在胚胎干细胞中可以调控Beclin1依赖的自噬。然而，Ambra1在与结肠癌细胞中自噬相关的信号通路中扮演何种的角色，这方面的研究仍然未见报道，在本研究当中，我们就Ambra1相关的自噬与凋亡应用结肠癌细胞株展开讨论。方法：1.使用人结肠癌细胞SW620 ，饥饿诱导SW620细胞株发生自噬，通过Wsetern blot技术检测自噬标志性蛋白LC3的表达，并且采用透射电镜以及免疫荧光进一步确定结肠癌细胞株SW620 中自噬体的形成，同时用Western blot检测目标蛋白Ambra1表达的变化2.使用凋亡诱导剂staurosporine（十字胞碱）和etoposide（足叶乙苷）处理SW620 细胞株，检测Ambra1蛋白表达的变化；使用calpain抑制剂以及caspase抑制剂，运用Westernblot的方法研究Ambra1在SW620细胞株凋亡时发生降解的机制3.使用Ambra1-siRNA干扰Ambra1RNA后观察Ambra1对于SW620 细胞株的自噬、凋亡和增殖的作用结果：1.饥饿诱导的SW620结肠癌细胞株自噬与Ambra1蛋白的表达成正相关即自噬过程中Ambra1 蛋白的表达增高。2.凋亡诱导过程中SW620 结肠癌细胞株自噬相关蛋白Ambra1被不断降解，caspase和calpain可能参与了Ambra1蛋白的降解。3. 通过使用Ambra1相应的干扰RNA瞬时转染SW620细胞，我们发现SW620结肠癌细胞株中干扰组相对于空转组对于staurosporine或者etoposide诱导的凋亡更加的敏感，并且在干扰组SW620 结肠癌细胞株中由饥饿诱导的自噬程度显著的降低。结论：在结肠癌细胞株SW620 中，肿瘤细胞通过自噬抵抗外部环境给予的压力，Ambra1可以通过结合Beclin1正性调控自噬的同时负性调控凋亡，提示：Ambra1 在中文摘要Ambra1介导的自噬与凋亡在结肠癌细胞中的研究结肠癌中调节自噬以及凋亡的机制可能会为进一步治疗结肠癌的提供必要的理论基础。关键词：结肠癌；自噬；凋亡；Ambra1作者：顾闻指导老师：汪良Ambra1regulatesautophagyandapoptosisincolorectal cancercellsAbstractBackgroundandobjective:RecentresearchhasrevealedaroleforAmbra1,an autophagy-related gene-related (ATG) protein, in the autophagicpro-survival response, and Ambra1hasbeenshowntoregulateBeclin1andBeclin1-dependentautophagyin embryonicstemcells.However,whetherAmbra1playsanimportantroleintheautophagy pathwayincolorectalcancercellsisunknown.Inthisstudy,wehypothesizedthatAmbra1 isan important regulator of autophagyandapoptosisin CRC cell lines.Methods:Totestthishypothesis,weconfirmedautophagicactivityinserum-starved SW620CRCcellsbyassessingendogenousmicrotubule-associatedprotein1lightchain3 (LC3)localization,thepresenceofautophagosomes(transmissionelectronmicroscopy) andLC3proteinlevels(Westernblotting).Ambra1expressionwasdetectedbyWestern blotinSW620cellstreatedwithstaurosporineoretoposide.Calpainand caspaseinhibitors wereemployedtoverifywhethercalpainsandcaspaseswereresponsibleforAmbra1 cleavage.ToexaminetheroleofAmbra1inapoptosis,Ambr