5 荧光分析.pptVIP

第五章 分子发光分析法p343molecular luminescence analysis 第一节 分子荧光和磷光分析基本原理 principles of molecular fluorescence and phosphorescence 一、分子荧光与磷光的产生 luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 2.分子的活化与去活化 E. 发射光谱的特性 强荧光的有机化合物具备下特征: ①具有大的共轭π键结构； ②具有刚性的平面结构； ③具有最低的单重电子激发态S1为π * →π型； ④取代基团为给电子取代基。 4.各种散射光的影响 溶剂产生的散射光：瑞利散射或拉曼散射 消除方法：选择合适的激发波长 因为荧光波长与激发波长无关，而散射光有关。 5.激发光照射的影响 有些荧光物质易发生光分解 采用强度较低的激发光，同时缩短测定时间 6. 荧光猝灭 五、荧光定性分析 依据：物质分子不同，激发波长和发射波长具有特征性。 根据荧光物质的激发光谱和发射光谱可鉴别化合物。 方法：比较法 在相同条件下，将待测物的荧光发射光谱与预期化合物的荧光发射光谱比较。特征峰波长与形态一致，则可能。 激发光谱结合发射光谱鉴定提高定性结果的可信度。 第二节 荧光(磷光)分光光度计 molecular fluorescence and phosphorescence spectrometer 第三节 分子荧光和磷光分析的应用 application of molecular fluorescence and phosphorescence analysis 四、磷光分析法的应用 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 第三节 化学发光分析 chemiluminescence analysis 一、基本原理 principle 二、特点 characteristics 三、装置与技术 instrument and technology 思考与习题p356 1、3、4、7 三. 单色器 平面衍射光栅 线色散率 聚光本领 分辨率 四. 检测器 光电倍增管 放大倍数：2n~5n;n=10,103~107， 最大108~109 五.样品池：液池、荧光池 1.样品池的材料：与紫外-可见分光光度计的吸收池一样 2. 吸收池的形状：紫外-可见分光光度计的吸收池两面透光 荧光分光光度计的样品池四面透光 波长范围 3. 使用注意事项 容易破碎 问题：紫外-可见分光光度计的吸收池与荧光分光光度计的样品池有什么区别？ 沾污问题 闪跃特性 六. 磷光分光光度计 1. 光学系统与荧光分光光度计的区别 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 切光器（斩波器） 共振荧光：10-12 sec 荧 光：10-8 sec 磷 光：1~10-4 sec 迟滞荧光：100~10-4 sec 2. 样品池与荧光分光光度计的区别 通常情况下，样品池需要放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，来测定低温磷光。 一. 工作曲线法 荧光熄灭工作曲线法 Fx F Cs Cx 直接荧光标准曲线法 F Cs Fx Cx 荧光分析的灵敏度比紫外－可见分光光度法高103～104. 二. 荧光分析法的灵敏度 在紫外光照射下会发生荧光的无机化合物很少，主要依赖于有机试剂形成的螯合物。 三. 荧光分析的应用 1. 无机化合物 直接荧光测定法 其中，较常测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到10-10; 某些元素虽然不与有机试剂形成发荧光的配合物，但是它会与发荧光的配合物争夺配位体，组成不发荧光的配合，使其产生荧光熄灭，由荧光熄灭的强度测定该元素的含量。 较常测定的元素有：F、S、Fe、Ag、Co、Ni、Cu、Mo、W 荧光熄灭测定法 自从1867年Goppelsroder进行了历史上首次的荧光分析工作，应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定以来，采用有机试剂可以测定70多种元素。 催化荧光测定法 较常测定的元素有：Cr、Nb、U、Te、Pb 某些元素虽然与有机试剂形成发荧光的配合物，但是反应速度慢，在某些微量元素的催化下，反应速度会加快，在特定的时间内可用来测定微量元素。 低温荧光测定法 常测定的元素有：Cu、Be、Fe、Co、Os、Ag、Au、Zn、Al、Ti、V、Mn、Er、H2O2、CN 某些微量元素存在，会催化发荧光的配合物产生荧光熄灭，在特定的时间内可用来测定微量元素。 溶液温度的降低，显著增强溶液的荧光强度。液氮 －1960