蛋白质相互作用芯片与自动化筛选程序的完美整合.PDFVIP

应 蛋白质相互作用芯片与 用 园 地 自动化筛选程序的完美整合 从噬菌体展示库中鉴定潜在的Fab抗体分子片段 通常情况下，噬菌体展示库中的候选噬菌体需 •迅速的从数以百计的特异性抗体中进行筛选 先经过初步的数轮筛选和扩增，再通过更细致 •大大降低特征鉴定中的瓶颈 的二次筛选，然后进行功能检验。采用这种策 - 高容量的二次筛选，减少对繁重的上游选择步 略的目的是为了减少对二次筛选的需求，不过 骤的依赖 同时它也降低了匹配目标的多样性并且增大了 •在早期阶段降低丢失潜在候选目标的风险 丢失潜在候选物的风险。另一种策略是限制初 - 多信息二次筛选 次筛选的次数，以便能收集更多的结合噬菌体 •使用相同的平台来排列，选择和分析结合的特 进入二次筛选。根据其动力学特征，多样化的 结合噬菌体收集方法可以增加发现具有功能活 异性，并确定活性位点结合噬菌体 性的候选蛋白的可能性。 •提高二次筛选的严苛性 - 减少分析时间 包含插入序列的DNA - 提高实验结果的一致性 - 尽量减少目标噬菌体的消耗 Fab被展示在病毒外壳上 我们需要一个二次筛选的过程，以此来比较每一 固定化的目标蛋白 个候选目标的亲和力的大小，同时不能妨碍整个 固体支持物 过程的运行，这就是Flexchip能够做到的。? （链亲合素小珠） Daniel J. Sexton, Dyax Corp., Cambridge, MA, USA a) Fab被展示在病毒外壳上固定的目标蛋白从包含了3x 1010 个Fab 的噬菌体展示库中选择固定的抗原Fab片段，得到 感谢 4608个候选目标 我们感谢Daniel J. Sexton博士 （Dyax Corporation, Cambridge, MA 02139, USA ）的通力合作。 电穿孔法导 入细菌中 批量克隆， 收集可溶性