花楸树热激蛋白70SpHSP70-3的克隆及表达分析.PDFVIP

花楸树热激蛋白70 （SpHSP70-3 ）的克隆及表达分析 （本研究所采用得实验材料由国家林木种质资源共享服务平台提供） 本研究克隆了花楸树热激蛋白 70 家族中的一个基因，SpHSP70-3 开放阅读框全长为 2,556bp，编码851 个氨基酸，蛋白等电点为5.08，分子量为93875.41, DNA 全长为3,815bp, 含有8 个内含子。与同源性较高的物种及模式植物的热激蛋白70 进行同源性分析及系统发 生树的构建，发现 SpHSP70-3 与苹果、白梨的亲缘及进化关系最密切，其次同源性较高的 也均为蔷薇科植物。蛋白结构域分析显示SpHSP70-3 在N 端含有丰富的SBD、NBD 以及热 激蛋白70 互作位点，C 端结构域可变性较大，为C 端亚结构域。SpHSP70-3 蛋白没有明显 大范围的亲疏水结构域，但靠近N 端的疏水结构域偏多，跨膜结构域共有7 个，其中得分 最高的位于氨基酸131-148 处，由内向外。三级结构预测其为单体蛋白，没有配体。为了探 究其耐热机制及表达模式，对 42℃处理下的花楸树叶片及花楸树不同发育时期的各器官组 织进行qRT-PCR 检测，结果显示：花楸树叶片在热处理24h 内，SpHSP70-3 均有几十倍-几 百倍的高表达变化，在热处理 1h 时，表达量达到最高，而后开始显著下降；SpHSP70-3 在 不同时期各组织当中均有表达，但基因在根中表达量最高，花期时各花器官的表达量较低。 关键词：花楸树 热激蛋白70 生物信息学 42℃胁迫 表达模式 Cloning and Expression Analysis of Sorbus pohuashanensis Heat Shock Protein 70 (SpHSP70-3) In this study, we cloned a gene of Heat Shock Protein 70 (HSP70) family in Sorbus pohuashanensis . The length of open reading frame of SpHSP70-3 is 2,556bp, encoding 851 amino acids. Protein isoelectric point is 5.08, while molecular weight is 93,875.41. The length of DNA is 3,815 bp, contains 8 introns. Homology analysis and phylogenetic tree analysis showed that SpHSP70-3 was most closely related to Malus domestica and Pyrus x bretschneideri, other high homology plants are also in Rosaceae. Protein domain analysis showed that SBD, NBD and heat shock protein 70 interaction sites are rich in the N-terminal of SpHSP70-3 .C-terminal domain which contains C-terminal subdomain was more variable. SpHSP70-3 protein does not have a wide range of hydrophilic or hydrophobic domain, but there are more hydrophobic domains near the N- terminal. There are 7 transmembrane domains in SpHSP70-3, the highest score region of amino acids located in 131-148, from inside to the outside. The tertiary structure is predicted to be a mon