选修1.1第一章　微生物的利用.pptxVIP

选修1　生物技术实践专题第一章　微生物的利用核心理解突破◎迁移升华思维的加油站◎考点一　大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌:是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌,在肠道中一般对人无害,是原核生物,是基因工程中广泛采用的工具。2.培养基(1)培养基按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后,制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。(2)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子五类营养物质。(3)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基制作牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤:计算→称量→溶化、调pH→灭菌→倒平板。3.无菌技术(1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。应根据情况进行消毒和灭菌。(2)消毒与灭菌的区别①消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、红外线消毒等。②灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等。(3)无菌操作要求①首要条件是各种器皿必须是无菌的。②各种培养基必须是无菌的。③菌转移操作的过程必须是无菌的。(4)灭菌方法①常用高压蒸汽灭菌法。即用高压蒸汽灭菌锅在 121 ℃(1 kg·cm-2压力)下灭菌15 min。②干热灭菌,用干热灭菌箱对耐热器具在160 ℃维持 2 h 或170 ℃维持1 h灭菌。③酒精灯灼烧法:如接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌。酒精灯火焰上方无菌区,可使菌转移过程在无菌条件下完成。④利用紫外灯照射灭菌。用紫外灯照射灭菌30 min。以上灭菌原理是使细菌体内蛋白质变性而达到杀灭细菌的目的。(5)消毒方法①煮沸消毒法:100 ℃煮沸5~6 min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,可用于培养器皿的消毒。②巴氏消毒法:80 ℃中15 min或70~75 ℃中30 min,实际生产中常用于鲜奶的消毒。③70%乙醇消毒法:70%乙醇杀毒能力最强,常用于实验时操作者手臂的消毒。(6)含抗生素的牛奶不能发酵为酸奶的原因:牛奶发酵成酸奶是利用乳酸菌来完成的。乳酸菌属于细菌,抗生素有抑制甚至杀死细菌的作用。4.细菌的培养与分离(1)细菌的培养①用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,细菌以分裂方式繁殖,分裂速度很快,条件适宜时,20分钟可分裂一次。②如要将已有细菌培养物转移到新的培养基时,一般用接种环转移带菌的培养物。(2)细菌分离①平板划线法:用接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作,将聚集的菌种逐步分散到培养基表面。培养10~20小时后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群,即菌落。②稀释涂布分离法:将菌液先进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,然后进行培养。③两种方法比较:划线分离,方法简单;涂布分离,单菌落更易分开,但操作复杂些。两种方法都能将混杂在一起的微生物分离成单个细胞,并能在培养基表面形成单个菌落,以便分离和纯化菌种。5.大肠杆菌的培养和分离实验(1)实验目的①进行大肠杆菌的扩增,利用LB液体培养基进行细菌培养的操作。②进行大肠杆菌的分离,用LB固体培养基进行细菌的划线培养。③说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。(2)实验步骤①灭菌:用高压锅在1 kg压力下对LB液体培养基、LB固体培养基和培养皿灭菌15 min。②自三角瓶向培养皿中转移并分装固体培养基:待冷却至60 ℃左右时,将三角瓶中的培养基在超净台上分装至几个培养皿中,制成固体培养基。③将大肠杆菌自斜面转移到三角瓶中的液体培养基中培养:将大肠杆菌用接种环在无菌操作下接种至三角瓶中的液体培养基中,在37 ℃摇床振荡培养12 h,完成大肠杆菌培养。④将菌液在固体平面培养基上划线分离。从前一步培养得到的菌液中获取菌种,用接种环以划线法接种至第二步制得的固体平面培养基中,在37 ℃恒温箱中培养12~24 h后观察菌落。⑤菌种保存:在无菌条件下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种在斜面上,37 ℃培养24 h后,放于冰箱内保存,温度控制在4 ℃。⑥实验结束后,为防止细菌污染,需要对培养物进行灭菌处理。(3)实验结果及相应结论若观察到在划线的末端出现不连续的单个菌落,表明菌已被分离了。【例1】 自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯,然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验,请回答有关问题。步骤:①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。②用稀释涂布平板法接种样品。③适宜温度下培养。结果分析:(1)测定的大肠杆菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,正确