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中国药典2010年版无菌检查及发展趋势 中国药品生物制品检定所 马仕洪 2010年 无菌/微生物限度检查理念 无菌检查现状 1、方法的修订与完善 2、技术现状与标准化 3、无菌检查的几个问题 1、方法的修订与完善 2010年版中国药典一、二、三部的无菌检查法基本延续2005年版。 2010年版中国药典三部逐渐向一、二部看齐。 1、方法的修订与完善 表3 2005年版无菌检查法主要方面与USP、BP的比较 硫乙醇酸盐流体培养基Fluid Thioglycollate Medium 大豆胰酪胨培养基(TSB)改良马丁培养基 2010版无菌检查法修订 1、附录 103 页，附录XI H 无菌检查法 第 6 行，增加“…防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出…” 2、附录 103 页，附录XI H 无菌检查法 第 13 行，增加“无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训” 2010版无菌检查法修订 3、附录 103 页，培养基 第 5 行，“…三周…”修订为“…3周…” 第 6 行，“…一年…”修订为“…1年…” 4、附录 103 页，培养基 第 7 行，删除“（用于培养好氧菌、厌氧菌）” 倒第 6行，删除“（用于培养真菌）” 2010版无菌检查法修订 5、附录 104 页，选择性培养基修订 2005版：按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂、灭活剂或表面活性剂。如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）、或β-内酰胺酶（用于β-内酰胺类供试品）、中和剂或表面活性剂的，其用量应通过同验证试验。 2010版：按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法验证试验。 2010版无菌检查法修订 6、附录 104 页，菌液制备，左第1行： 2005版：加入3～5ml 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。 2010版：加入3～5ml 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜的方法吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。 2010版无菌检查法修订 9、附录 104 页，方法验证 左第1、2行，“…药品…”修订为“…产品…” 10、附录 104 页，菌种及菌液制备 左第1行修订为：“除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。” 2010版无菌检查法修订 11、附录 104 页，薄膜过滤法 左第1行，“…将规定量…”修订为“…取每种培养基规定接种…” 左第1行，增加“…总量…” 左倒第1行，“…按…”修订为“…置…” 12、附录 105 页，直接接种法 第4行，“…铜绿假单胞菌…”修订为“…大肠埃希菌…” 第6行修订为“…其中1管接入每支培养基规定量的供试品量…” 第7行，“…按…”修订为“…置…” 2010版无菌检查法修订 13、附录 105 页，结果判断 修订为“…则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中微生物的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。 2010版无菌检查法修订 14、附录 105 页，检验量 第 3 行，删除“采用直接接种法时，” 。 第 5 行，删除“检验量应不少于直接接种法的总接种量，” 15、附录 105 页，阴性对照 第 2 行，增加“应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作” 。 第 4 行，“…的生长和存活无影响…”修订为“…无毒性…” 左第1行，“…进行供试品无菌检查时，…”修订为“…供试品无菌检查…” 2010版无菌检查法修订 16、附录 105 页，阴性对照 左第4行，“…如果容器…”修订为“…如果供试品容器…” 左第5行，“…向供试品容器内导入…”修订为“…向容器内导入…” 17、附录 105 页，薄膜过滤法 左第4行