2010年版中国药典微生物检验主要增修订内容王瑞玲.pptVIP

2010年版中国药典微生物检验主要增修订内容 陈 红 微生物限度检查法 前言及检验量 供试液制备 计数实验的培养基适用性检查 计数实验的方法验证 计数实验的操作方法 控制菌检查的培养基适用性 控制菌检查的方法验证 控制菌检查的内容 标准体系 前言增修订内容 前言中修订了控制菌检查的温度，规定与细菌计数实验温度相同，均为30～35℃ 前言中增订了对于特殊品种可以最小包装单位报告的规定 2005版控制菌检查的温度，规定为35～37℃ 检验量增修订内容 检验量中对要求进行沙门菌检查的供试品，其检验量应增加20g或20ml的规定(05版检验量中对要求进行沙门菌检查的供试品，其检验量应增加10g或10ml的规定) 特殊品种的检验量可以酌减（特殊品种包括：药典规定微量包装药品，如0.2ml/支滴眼剂，药典规定贵重药品） 中药膜剂检验量50cm2修改为100 cm2 供试液制备增修订内容 增订了贴剂供试品的制备方法 1、在无菌环境中进行，用验证后的方法制备成供试液 2、避免粘贴面粘合在一起 3、置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀释剂中，制成供试液。 4、充分振摇 5、也可采用其它的适宜方法制备成供试液 供试品检查时使用表面活性剂应证明其对微生物生长和存活无影响修改为无毒性。 供试液的制备若需加温时，可采用经验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超过45℃ 具抑菌活性供试品：删除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的方法，避免损伤供试品中污染的微生物。 在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法。 修订了离心沉淀法，删除了高速离心（3000转/分）的规定， 两次离心修改为一次离心（500转/分）不超过3分钟，取全部上清液用于检查。并对该方法的使用范围进行了限定，（A仅使用于微生物限度检查供试液的制备。B尽量避免使用，不可使用快速离心。） 计数实验的培养基适用性检查 该部分内容均为新增 规定了该内容的应用范围（细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。） 采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法 标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉； 计数实验的方法验证增修订内容 增订了常见干扰物的中和剂或灭活方法的参考表格(2010版二部附录P109页表1 ) 对采用多种方法仍无法得到满意验证结果的情况，提供了两种办法 允许使用更高稀释级的供试液进行方法验证实验，并以该稀释级供试液作为最低稀释级供试液进行供试品检验 允许选择回收情况最接近要求的方法和试验条件进行供试品的检验 供试品检查增修订内容 平皿法 删除了应取2～3个连续适宜稀释级供试液进行检验的规定修改为按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备 细菌培养时间延长为3天，霉菌、酵母菌培养时间延长为5天；规定必要时均可延长至7天进行菌落计数并报告 菌数报告规则进行了修订：计数不再设置下限；以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告 A若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。 B细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据 薄膜过滤法 滤膜直径调整为约50mm，并规定若采用其它直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整 总冲洗量规定不得超过1000ml 控制菌检查的培养基适用性 该部分内容均为新增 规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目 （1）控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。 （2）检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力试验结果与对照培养基比较。（参照中国药典2010版二部附录P110表2）。 采用标准菌种比较的判定方法 根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法 在检查中引入了涂布接种的概念 控制菌检查的方法验证中删除了阴性菌对照组的概念 控制菌检查的内容 所有的生化试验均修订为鉴定试验 大肠菌群的培养基进行了修订，修订为乳糖胆盐发酵培养基（因其含有指示剂，更明显能检出）。 梭菌的增菌培养基修订为梭菌增菌培养基，删除了庖肉培养基，并修订了培养时间为48 小时（05年药典72~96小时） 增加了白色念珠菌检查法，并增订了与之相关的培养基 增菌培养用的是沙氏葡萄糖肉汤培养基， 分离培养划线接种的是沙氏葡萄糖琼脂培养 典型菌落：