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其他重要的基礎生物技術 • Restriction map • RFLP • DNA fingerprinting • Electrophoresis / Blotting / hybridization • Colony hybridization /immunoassay • Sequencing • PCR • Site-direct mutagenesis End-labeled restriction map Restriction map 的臨床價值 • 重組DNA的原始序列 • 檢查genome是否發生缺失或突變 (藉由限制脢圖譜的異同決定) • 親子鑑定 (如RFLP) 實驗室小插曲 - or -32p ATP needed ? To generate an A-radiolabelled nucleic acid, ______ is needed . (usually polymerization reaction such as PCR) To generate an 3’end-radiolabelled nucleic acid, ______ is needed . (usually kinase reaction such as T4 kinase) 實驗室小插曲 Radio-isotope • Isotope ? • Radio particles released – beta-emitter (3H, 14C, 32P, 35S ) – Gamma-emitter (125I) cf: X ray • Half-life: – 14d for 32P – 5760y for 14C • Unit: – 1dpm = 10 – 1Ci =3.7 x 10 dpm • Shelter: RFLP (“reflip”) • Restriction fragment length polymorphisms • Polymorphynism :一基因出現兩種以上的DNA序列 • 應用: 可以偵測出DNA微小的差異(classification, forensics, paternal discrimination, disease screening… etc) • 思考: RFLP pattern與正常人相同，表示沒有異常? • BADs: 方法受限於限制脢的專一性 Which band is betaA ? betaB ? who is carrier among A,B,C,D ? A B C D BetaA Q: 1. 鐮刀型血球的病患(ss)與正常人(SS)生的小孩, 表型如何 ? 2. 鐮刀型血球帶原者與正常人生的小孩, 表型如何 ? 3. 鐮刀型血球帶原者與正常人生小孩, 四個小孩都健康的機 率? DNA fingerprinting 定義 利用限制脢分析的技術,能將每一個人的DNA區分出來的方法 英國已發展出一種商業產品,作為DNA fingerprinting之用,主 要是利用迷你衛星(minisatellites)當探針來做RFLP 迷你衛星(minisatellite) 人類基因組(genome) 中,存在一些區域,內