17-18版：章末整合提升：第四章 生物化学与分子生物学技术实践（步步高）.pptx

;知识系统构建;;法医;;6.PCR扩增过程中要进行无菌操作，避免污染，且向离心管中加入模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸以及TaqDNA聚合酶。 7.变性是在94 ℃高温下使模板双链DNA解旋。 8.退火是将反应体系温度降至55 ℃，使引物与模板DNA链配对。 9.延伸是将反应体系温度回升至72 ℃左右，在TaqDNA聚合酶作用下，使引物链延伸，形成互补的DNA双链。 10.DNA分子的测定：DNA分子＋二苯胺试剂 蓝色物质。;;;3.醋酸纤维薄膜电泳法 (1)原理：不同的物质在同一电场中的泳动速度不同。 (2)影响因素：泳动速度主要取决于带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少。一般来说，带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。此外，电场强度、溶液的pH等因素对泳动速度也有影响。 (3)优点：简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样品用量少、没有吸附现象、电泳后区带界限清晰等优点。;4.凝胶色谱法 根据蛋白质分子量的大小差异对其进行有效分离的方法。 (1)相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。 (2)相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。;例1　试回答下列“蛋白质提取与分离实验”的有关问题：;(2)若要去除血清蛋白中的小分子杂质，采用图1装置。透析液是 ，一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液是否出现紫色？并说明判断的依据：_____________________________________________ 。;(3)图2、图3分别表示电泳法分离蛋白质和纸层析法分离叶绿体中色素的结果。不同蛋白质得以分离是因为_________________________________ ；不同色素得以分离是因为_____ 。;;;解析　植物芳香油的提取方法有蒸馏法、压榨法、萃取法等，具体采用哪种方法，要根据植物原料的特性来决定。挥发性强，并在蒸馏过程中有效成分不被破坏的宜用蒸馏法提取；挥发性较差的，受热时有效成分易分解的宜用萃取法；原料易焦糊的宜用压榨法提取。出油率的高低不仅与提取方法有关，而且与实验过程的操作、原料的处理等方面有关，因此A、B项错误。 水蒸气蒸馏法，由于设备简单，操作容易，是提取植物芳香油的常用方法，但不是所有芳香油的提取都适合用此法，因此C项错误。;;(2)退火：系统温度下降至55 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对原则与两条单链DNA结合(如下图)。;2.PCR反应的结果 (1)PCR一般要经历三十多次循环，每次循环都可以分为变性、退火、延伸三步。 (2)两个引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。 3.特别说明 (1)DNA复制需要引物的原因：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。PCR中，引物长度通常为15～40个核苷酸。 (2)DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 (3)当PCR反应体系的温度由变性后冷却到55 ℃左右时，引物与模板可结合，一般不需考虑解开的两个DNA模板链的重新结合。 (4)在进行PCR扩增后，若以一个DNA片段为模板，经n次循环后DNA数为2n；若以N个DNA片段为模板，经n次循环后DNA总数为N·2n。;;解析　图中片段a、b只有一种引物， 是由原始DNA链为模板复制而来，其长度比片段c长，A项不正确； 由于原始模板在每次循环中均可作为模板，则每次循环都能产生图中片段a、b，B项不正确； 由于第一次循环的产物只有一种引物，而图中片段c有两种引物，则最早出现在第二次循环，C项正确； 经过30次循环后，得到的DNA片段总数为230，这包括图中的片段a、b，故D项不正确。;;解析　抽提蛋白质的基本原理是根据蛋白质的物理性质，加入不同的试剂后，使蛋白质溶于试剂中而抽提蛋白质。强酸、强碱都会使蛋白质变性而沉淀。;1;解析　带电粒子在电场中迁移的速率是带电粒子带电性质、带电量、粒子大小、粒子形状共同作用的结果。;4.PCR过程与细胞内的DNA复制