17-18版：1.1.3 导入、检测和鉴定目的基因（步步高）.pptx

;;课堂导入 方式一　通过前面的学习，我们了解了基因工程中目的基因的获取及基因表达载体的构建。 在目的基因与载体连接成重组DNA分子以后，下面的重要工作主要是将其导入受体细胞进行扩增和筛选，获得大量的重组DNA分子，这就是外源基因的无性繁殖，即克隆(cloning)。 由于外源基因与载体构成的重组DNA分子性质不同、宿主细胞不同，将重组DNA导入宿主细胞的具体方法也不相同。;方式二　目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测和鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。以上步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。;一、导入目的基因;;受体细胞;;(2)在用土壤农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，为什么一定要将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA上？;2.植物基因工程常用的受体细胞为什么可以是体细胞，而动物基因工程一般只用受精卵？ 3.为什么微生物细胞适合作为基因工程的受体细胞？ ;;解析　一般农杆菌不能感染的植物是单子叶植物，可感染双子叶植物和裸子植物。利用其感染性，可实现目的基因导入植物细胞。真正可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上的是农杆菌T－DNA片段，因此目的基因必须插入到该部位才能成功。;解析　根据T－DNA这一转移特点，可以推测该DNA片段能控制合成DNA连接酶、限制酶以实现与双子叶植物细胞染色体DNA的整合。;解析　植物细胞受伤后可产生酚类物质，促进农杆菌向植物细胞转移。;解析　植物基因工程中除了农杆菌转化法之外，还有基因枪法和花粉管通道法等。;一题多变 判断正误： (1)获得上述转基因植物的核心步骤是a(　　) (2)用含有重??Ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，从而把目的基因导入植物细胞，在这个过程中所有细胞都导入了目的基因(　　) (3)在过程a中只需要DNA连接酶参与(　　) (4)用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，要经过植物组织培养才能获得表现出新性状的植物(　　) (5)因病毒能够侵染正常细胞，有的病毒还能将自己的核酸整合到宿主细胞的染色体上，所以动植物病毒也可作为基因工程的载体(　　);;解析　不同受体细胞导入目的基因的方法不同，每种方法都有利弊。目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济和有效；目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法；目的基因导入大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用钙离子处理细胞，使细胞的生理状态发生改变，完成转化。;;目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测和鉴定才能知道。;1.DNA水平检测：采用 。主要做法是用 标 记的已知DNA片段作 检测受体细胞。如果能发生特异性结合，说明目的基因已经插入转基因生物 中。;2.RNA水平检测：采用 技术。用已标记的 作为探针与待测生物体内提取的 分子杂交，观察是否出现杂交带。 3.蛋白质水平检测：采用 法。从待测转基因生物中提取 ， 用相应的 进行杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已经表达了。 4.个体水平检测：对个体的 进行检测。;;(2)DNA分子杂交的原理是什么？除了用于目的基因的检测与鉴定以外，试举例说明还有哪些应用？ ;(3)检测目的基因是否转录出了mRNA，采用分子杂交技术，这种技术与DNA分子杂交技术有何异同？;2.检测棉花中导入的抗虫基因是否表达的最简便的方法是什么？;关于不同分子检测的原理、场所、探针的异同 (1)原理：转录水平的检测原理与复制水平的检测原理是相似的，只是被检测的物质不再是转基因生物的基因组DNA，而是转基因生物细胞内的mRNA；翻译水平的检测，则是利用抗原与抗体特异性结合的原理。 (2)场所：不论是复制水平、转录水平还是翻译水平的检测，都是在体外进行的。 (3)探针：在DNA分子、mRNA分子上检测目的