11 基因工程的原理（课件）.ppt

返回 普通玫瑰 蓝色妖姬 思考：蓝色妖姬如何培育的？ “蓝色妖姬”最早来自荷兰是一种加工花卉。它是用一种对人体无害的染色剂和助染剂调合成着色剂，等白玫瑰（或白月季）快到花期时，开始用染料浇灌花卉，让花像吸水一样，将色剂吸入进行染色。 据花卉专家介绍，目前世界上极少有自然生长的蓝色玫瑰花，现在市场上出售的“蓝色妖姬”都是人工染色后的产物。比较正规的“蓝色妖姬”是在花卉的成长期开始染色，颜色能均匀地附着在花瓣上，看上去比较自然；部分商贩直接将普通的白玫瑰花采摘后染成蓝色，颜色不自然，也容易掉色。 2008年11月1日闭幕的东京国际花卉博览会上，全球首批真正的蓝玫瑰首次在公众面前亮相。这种蓝玫瑰是转基因玫瑰，被植入三色紫罗兰所含一种能刺激蓝色素产生的基因，花瓣因而自然呈现蓝色。 限制性内切酶 1.来源： 大肠杆菌等微生物 2.特点： 识别特异的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点切割磷酸二酯键。 3.结果： 产生粘性末端 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。 点击播放 1.连接酶的作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 问题 用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键？ 2.连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。 点击播放 概念： 按照人们的意愿，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具进行重新组合，然后转入另一种生物的体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。 意义： 能够打破生物种属的界限，在分子水平上定向改造生物的遗传特性。 目的基因的获得 重组载体的构建 重组载体的转化和筛选 目的基因的表达和鉴定 实验原理： DAN不溶于酒精溶液，但细胞中的许多其他物质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以提取出含杂质较少的DNA。 DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 实验程序： 材料准备(新鲜菠菜和体积分数为95%的酒精溶液，冷冻处理)→研磨（冰上操作）→过滤→离心→加冷酒精→鉴定（沸水浴） 1.某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶（Amy）基因a,通过基因工程的方法，将a转到马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。这一过程涉及 （ ） A.目的基因进入受体细胞后，可随着马铃薯的DNA分子的复制而复制，传给子代细胞 B.基因a导入成功后，将抑制细胞原有的新陈代谢，开辟新的代谢途径 C.细菌的DNA分子较小，可直接作为目的基因，导入受体中不需要整合到马铃薯的DNA分子中 D.目的基因来自细菌，可以不需要运载体直接导入受体细胞 A 2.在基因工程中用来修饰改造基因的工具是 （ ） A.限制酶和DNA连接酶 B.限制酶和DNA水解酶 C.限制酶和RNA聚合酶 D.DNA连接酶和RNA聚合酶 3.下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件 （ ） A.具有某些标记基因 B.决定宿主细胞的生存 C.能够在宿主细胞中复制 D.有多个限制酶切点 B A 谢谢！再见 获取目的基因的方法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离法 ——鸟枪法 　用限制酶将完整的DNA随机切成许多片段，然后用某种检测方法挑选出所需要的基因。如用“核酸探针法”，核酸探针是用放射性同位素标记的DNA单链，具有非常特异的脱氧核苷酸序列，能与DNA互补链结合。　　 ⑵人工合成法——反转录法和化学合成法 反转录法 ： mRNA→单链DNA→双链DNA（目的基因） 化学合成法： 氨基酸序列→基因序列→合成目的基因 返回 条件： ①能在受体细胞中复制 ②具适宜的限制酶切割位点，供外源DNA片段插入 ③具有标记基因，便于选择含有载体的细胞 ④对受体细胞无害 类型 质粒、噬菌体或其它一些病毒，最常用的是质粒 返回 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 提取质粒并用限制酶切割 用连接酶将目的基因和质粒连接 重组载体的构建 转化方法： 基因枪法、显微注射法和花粉管通道法。 受体是动物细胞时最常用的是显微注射法，是植物细胞时常用基因枪法。 筛选： 利用载体上的标记基因，借助选择培养基进行筛选。 将目的基因