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项目四PCR扩增目的基因大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶基因glya.ppt
基因操作技术;提 纲;ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC;ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC;ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC;;生物样品;基因组DNA;DNA聚合酶;引物;94℃变性;94℃;Taq DNA聚合酶;Taq DNA聚合酶;Taq DNA聚合酶;Taq DNA聚合酶;Taq DNA聚合酶;72℃;;;;;;;;;;PCR过程 PCR的特点;;标准的PCR反应体系 10xbuffer 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L ;三、PCR的反应体系;三、PCR的反应体系;三、PCR的反应体系;三、PCR的反应体系;三、PCR的反应体系;如何设计PCR反应体系?;PCR产物的保存;;四.PCR引物设计及相关软件使用;(一). 引物设计的基本原则;1. 引物的长度;2. 引物二聚体及发夹结构; 引物的GC含量一般为40-60%,过高或过低都不利于引发反应。 退火温度55℃左右 退火温度+5~10 ℃ =Tm值 Tm值(解链温度)=4(G+C)+2(A+T);4.引物5’端设计;(二). Premier 5.0 引物设计软件简介;Primer Premier 5.0 的使用技巧简介;;Primer Premier 5.0使用介绍(1);基本信息;引物设计界面;引物有哪些信誉好的足球投注网站选项设定;有哪些信誉好的足球投注网站结果;引物信息;一对理想的引物应当不存在任何一种上述结构,因此最好的情况是最下面的分析栏没有 But …;引物编辑;引物编辑;PCR仪;(一) PCR基因扩增仪的类型 ;1. 水浴式PCR基因扩增仪;2. 气流式PCR基因扩增仪;3. 金属模块式PCR基因扩增仪;;;;;维护注意事项;PCR反应条件的选择?;PCR仪操作指南;;;;五、PCR的应用;(一)、遗传病的诊断;二、感染性疾病病原体检测;三、RT-PCR检测肿瘤微转移;三、RT-PCR检测肿瘤微转移;四、性别鉴定;五、转基因检测;六、其他;;复习题
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