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2.2.2-动物细胞融合与单克隆抗体的制备-很棒
如何大量生产单克隆抗体? 利用B淋巴细胞产生抗体的功能。 利用肿瘤细胞无限增殖的特性。 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。 应用: 动物细胞融合 设计方案: 一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 化学性质单一、特异性强 杂种细胞 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的特点: (四)、单克隆抗体的制备过程 4.过程: ①免疫动物 注射抗原的目的是什么? 获得能产生相应抗体的B淋巴细胞(浆细胞) 诱导细胞融合常用方法是什么? 灭活的仙台病毒 如何进行筛选? 具有筛选作用的培养基(选择培养基) ?种 BB 、B瘤 、 瘤瘤 、 杂交细胞 如何获得大量的单克隆抗体? ②免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制备 ③细胞融合 ④杂交瘤细胞的选择培养 ⑤杂交瘤细胞的筛选 ⑥分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立 ⑦单克隆抗体的大量制备 ? ? 抗原 效应B细胞 筛选 筛选 (AA型、BB型) AB型杂交瘤细胞 能产生所需抗体的细胞 过程: 抗原 小鼠 效应B细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞融合、筛选 多孔培养板单个 细胞培养,筛选 能产生特定抗体的细胞群 体外培养 体内培养 提取出单克隆抗体 1.在制备单克隆抗体的过程中,选用哪两种细胞进行融合?为什么选择这两种细胞? 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体,但不能无限增殖;骨髓瘤细胞能无限增殖,但不能产生单一抗体。 2、在这过程中进行了几次筛选?分别在哪个步骤进行筛选? 两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞; 第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 五、单克隆抗体的应用 请同学们根据自己所收集的资料,谈谈单克隆抗体的应用。 1、可用于作为诊断试剂:有准确,高效,简易、快速的优点 2、可用于疾病治疗 3、可用于运载药物(作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹“。) “生物导弹”=单克隆抗体+药物 细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 浆 筛选 瘤细胞 杂交 细胞培养 选出能产生特定抗体的细胞群继续培养 体外培养 体内培养 从培养液或小鼠腹水中取出 单克隆抗体 杂交瘤细胞:既能大量增殖,又能产生 特定抗体。 单克隆抗体:特异性强,灵敏性高,并 可大量制备。 植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较 三.细胞工程比较 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学法 (同左) 灭活的病毒 物理(离心、振荡、电刺激) 化学(聚乙二醇) 诱导方法 使细胞分散后 诱导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜流动性 细胞增殖 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 克服远缘杂交不 亲和性的障碍 我就是清脆可口, 人见人爱的大白菜! 再分化 植物体细胞杂交技术利用什么原理? 用什么方法可以诱导植物细胞融合? 一、原理: 细胞膜具有流动性 细胞的全能性 二、诱导方法:离心 振动 电激 、聚乙二醇 植物体细胞杂交技术有什么用途? 三、用途: 获得杂种植株 脱分化 阜阳市城郊中学 刘恒振 一、动物细胞融合 有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。 两个细胞正在融合 受精作用 (一)概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多 个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 (二)动物细胞融合的过程 与植物原生质体融合原理相同,方法类似。 杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 一、动物细胞融合 ⑴.原理: 1、动物细胞融合的基本原理是什么? 2、动物细胞融合的诱导方式是什么?与植物细胞融合的诱导方式有什么不同? 与植物原生质体融合的基本原理相同,即细胞膜的流动性。 ⑵.诱导方式: 物理法: 电激、振动、离心 化学法: 聚乙二醇(PEG) 生物法: 灭活的病毒 例如:仙台病毒 仙台病毒 紫外线 丧失感染性 (不感染细胞) 保留融合活性 (诱导细胞融合) 细胞A 细胞B 杂交细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合,形成杂交细胞 (细胞膜具有一定的流动性) (三)动物细胞融合的应用 1.突破有性杂交方法的局限
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