植物组织培养 第3章节 植物组织培养技术——灭菌方法、无菌操作技术.pptVIP

第三章 植物组织培养技术---灭菌方法、无菌操作技术;教学目的要求;本节教学重点、难点：;第一节 外植体的选择和消毒;外植体（叶）的各个部分其芽、苗再生能力也很不相同 ;二、灭菌与消毒;菌类： 细菌、真菌、放线菌、藻类及其他微生物。 茵的特点： ☆极小，肉眼看不见； ☆无处不有，适应能力强； ☆繁殖力极强，条件适宜时便可大量滋生。 消毒： 指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用的过程。 ;（二）常用的灭菌与消毒方法;2.灼烧灭菌（用于无菌操作的器械 ）;3.干热灭菌（玻璃器皿及耐热用具）;4.过滤灭菌（不耐热的物质 ）;5.紫外线和熏蒸灭菌（空间）;6.喷雾灭菌（物体表面）;7.植物材料表面用消毒剂灭菌√;第二步：是对材料的表面浸润灭菌。;3. 化学灭菌剂处理 消毒剂消毒原理： 利用氯气、重金属、原子态氧来杀菌。; 第三步.无菌水涮洗 ——是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用。 ☆灭菌后用无菌水涮洗3～4次即可； ☆升汞残毒较难去除，所以应当用无菌水涮洗6～10次。;第二节 外植体的接种和培养 ;（一）无菌操作步骤（实验课 ） (1)接种室消毒：在接种前用甲醛熏蒸接种室，在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯 (2)摆放接种用具：将培养基、接种用具等分别防入小推车或超净工作台上(无菌水.镊子.解剖刀.酒精棉.酒精灯.培养皿.小烧杯等) (3)进入接种室：接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； (4)手及台面消毒：用70%酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后按一定顺序擦拭工作台面； (5)培养材料灭菌：将接种材料预先放入烧杯，置入超净台进行表面消毒。 (6)接种用具灭菌：先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子浸泡在95%酒精并取出从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； (7)接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。 注：接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。;（二）接种技术 （实验课）;第二节 外植体的接种和培养;1．培养方法;2．培养步骤;2．培养步骤; 2．培养步骤;;3、培养过程中常出现的问题及解决方法（第四章 植物组织培养中常见问题及解决办法）;4.植物组织培养的环境条件;温度(temperature) ;光照(light);湿度 (humidity);渗透压(penetrating pressure);pH值 (pH value);种类;玻璃化;5、试管苗移栽驯化第五章 组培苗的驯化和移栽;;思考题