微生物试验教学大纲2017.DOCVIP

忻 州 师 范 学 院 《微生物学实验》实验教学大纲 课程名称：微生物学实验 课程类别：专业必修课 学 时：18 学时 学 分：1学分 考核方式：考查 适用专业：生物科学 、生物技术 开课学期：第3学期 一、实验教学的目的与基本要求 微生物学实验课是生物科学专业的基础实验课，是生命科学中的一门最有特色的实验课程。通过本课的实践，可以使学生掌握微生物学实验的最基本操作技能，加深并理解课堂讲授微生物学的理论，同时对微生物的多样性有更加直观的认识与了解。 本课程的任务是： 1、培养学生掌握实验及仪器的原理、操作，应用实验仪器和工具观察认识微生物各种基本的生命特征； 2、对学生进行实验技能的基本训练，使学生掌握微生物显微观察技术、无菌操作技术、分离纯化技术、纯培养技术及基本的检测鉴别技术等基本技术； 3、培养学生观察、分析问题和解决问题的能力，加强学生的创新意识和能力，培养学生实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约，爱护公约的良好作风。 二、实验项目设置及学时分配 序号 实验项目名称 学时 实验类型 备注 1 培养基的制备、分装与灭菌 3 验证性 2 革兰氏染色 3 综合性实验 3 细菌细胞的大小与数量测定 3 综合性实验 4 用杯碟法测定抗生素的效价 4 综合性实验 5 细菌鉴定中的常规生理生化反应 5 综合性实验 合计 18 ---------------- 实验一：培养基的制备、分装与灭菌 实验目的： 了解培养基的主要成分、基本材料和种类，掌握配制培养基的基本过程。 实验仪器： 灭菌锅、烘箱、电磁炉、平底锅、天平、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂粉、乳糖、蛋白胨、伊红Y、美兰、葡萄糖、孟加拉红、去氧胆酸钠、链霉素、猪胆盐、溴甲酚紫、甘露醇。 实验要求及内容： 1. 玻璃器皿洗涤与包装 2. 培养基的制备、分装 3. 灭菌操作 实验二：革兰氏染色 实验目的： 了解革兰氏染色的原理；掌握革兰氏染色的操作方法。 实验仪器： 普通光学显微镜（有油镜）、无菌操作台、灭菌锅、烘箱共、恒温振荡摇床（可控温）、恒温生化培养箱、酒精灯，载玻片，镊子、接种环、滤纸3片、微波炉。香柏油、结晶紫0.5g、95% 乙醇、草酸铵、碘、碘化钾、番红、无水乙醇。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Saphylococcus aureus）、未知菌等细菌16-18h的培养物。 实验要求及内容： 1、制片：与细菌简单染色法的涂片、干燥和固定过程相同。 2、初染：滴加结晶紫染色液于菌膜上1-2分钟，流水冲洗。 3、媒染：卢戈氏碘液冲洗一下菌膜，再滴加该液于菌膜上，静置1分钟。 4、脱色：95%酒精冲洗至无色后，再水洗。 5、复染：番红染色液覆盖菌膜，静置2分钟后水洗，干燥。 6、镜检：显微镜观察。 7、三区涂片染色：在熟悉上述革兰氏染色过程后，在同一载玻片上分别用大肠杆菌、枯草芽孢杆菌（或金黄色葡萄球菌）单独涂片及二者的混合涂片，染色、镜检比较观察。 实验三：细菌细胞的大小与数量测定 实验目的： 1．掌握血球计数板的使用方法 2．学习并掌握使用显微测微尺测定微生物的大小的方法。 3．掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。 实验仪器： 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血细胞计数板、香柏油，无水乙醇、美兰、木霉斜面菌种(菌悬液)、试管、纱布、盖玻片、滴管、擦镜纸。 实验要求及内容： 一、微生物数量的测定 （一）血细胞计数法 1、菌悬液制备： 2、检查血细胞计数板 3、加样品 4、显微计数 5、清洗 二、微生物大小的测定 1、目镜测微尺的安装和校正 2、微生物大小的测定 实验四：用杯碟法测定抗生素的效价 实验目的： 1.了解用杯碟法测定抗生素效价的原理。 2.掌握青霉素效价生物测定的具体操作步骤与方法。 实验仪器： 金黄色葡萄球菌（Streptococcus aureus），产黄青霉（Penicillium chrysogenum）、未知菌。牛肉膏蛋白胨培养基(作生物测定用时，平板应分上下两层，上层须另加0.5%葡萄糖)。1%pH6磷酸缓冲液：K2HPO40.2g（或K2HPO4.3H2O0.253g），KH2PO40.8g,蒸馏水100ml。0.85%NACL生理盐水溶液。苄青霉素钠盐：1667U/mg(1U即1国际单位，等于0.6μg)。牛津小杯[不锈钢小管，内径（6±0.1）mm