医学免疫学精品教学（复旦大学）实验一免疫比浊法2017 邵.pptVIP

* 解释为何要进行多种方法检测。 * 抗原抗体反应特点 特异性 比例性 可逆性 敏感性 特异性：抗原表位（决定簇）与抗体超变区结合的特异性，是由两者在化学结构和空间构型上呈互补关系所决定的。 （注意：共同抗原和交叉反应） 抗体过量 比例合适 抗原的量 抗原过量 抗体沉淀的量 前带 等价带 后带 比例性：指抗原抗体特异性结合时，生成结合物的量与反应物浓度的关系，只有当二者浓度比例适当时，易出现可见的反应。 确定 的浓度非常重要，即在实验中需对Ag/Ab进行适当的 ，调整二者的比例，产生可见反应。 一般原则：固定 含量（ Ag/Ab ）的浓度，稀释 含量的 (Ab / Ag)。 一般可溶性Ag稀释 ，颗粒性Ag，稀释Ab。 Ag/Ab 稀释 低 高 Ag 可逆性：可逆性指抗原抗体结合后形成的复合物在一定条件下可发生解离，恢复抗原抗体的游离状态。 敏感性：抗原抗体反应具有高度的敏感性，不仅可以定性，而且可以定量。 动态平衡公式: [Ag] + [Ab] [Ag-Ab] K1:结合常数；K2：解离常数 K1 K2 抗原抗体反应阶段性 抗原抗体反应可分为两个阶段。 第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅须数秒至数分钟，但不出现可见反应； 第二为可见反应阶段，这一阶段抗原抗体复合物在环境因素(如电解质、pH、温度、补体)的影响下，进一步交联和聚集，表现凝集、沉淀、溶解、补体结合介导的生物现象等肉眼可见的反应。此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。 影响抗原抗体反应的因素 ①电解质：Ag、Ab多为蛋白质，中性或碱性条件下，两者结合后亲水性弱。受电解质影响失去部分负电荷，复合物间的排斥力下降，从而使反应第一阶段已形成的Ag-Ab复合物彼此进一步连接，出现明显凝集或沉淀反应。 ②温度：在较高的温度下，两者碰撞的机会较多，反应速度可加快，但温度过高，Ag、Ab变性失活。通常为37℃左右。 ③酸碱度：pH值太高或太低均直接影响Ag、Ab的性质,通常为6-8。 可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应。（实验一、二） 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应。（看视频） 抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应。细菌抗原表现为溶菌反应，红细胞抗原表现为溶血反应。 （略） 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应。（略） 5. 标记免疫的抗原抗体反应。（实验三，五） 抗原抗体反应的类型 自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应） 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术） 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反应过程 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合 免疫检验技术发展进程的主要阶段 表 抗原抗体反应的基本类 型 表 反应类型 实验技术 检测方法 敏感度 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀、检测浊度 +，++++ 琼脂凝胶扩散 观察扫描沉淀线或环 + 凝胶电泳技术 或峰或弧 ++ 补体参与反应 补体溶血试验 以裸眼或光电比色仪 ++ 补体结合试验 观察测定溶血现象 +++ 免疫标记技术 荧光免疫技术 检测荧光现象 ++++ 放射免疫技术 检测放射性 ++++ 酶标免疫技术 检测酶底物显色 ++++ 发光免疫技术 测定发光强度 ++++ 生物素-亲合素技术 结合其它标记技术 ++++ 金标免疫技术 检测金颗粒沉淀 ++++ 凝集反应 直接凝集试验 用裸眼、放大镜或显 + 间接凝集试验 微镜观察红细胞或胶 ++ 凝集抑制试验 乳等颗粒和各种凝集 +++ 协同凝集试验