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毕业答辩 答辩人： 张美琴 指导老师：廖金铃教授 目录 研究背景 研究方法 研究结果 讨论与展望 一、研究背景 生物防治是植物寄生线虫的一项重要防治措施，因其符合现代环保与健康理念，受到普遍重视，并已取得可喜研究成果。 目前已报道的线虫天敌细菌主要是巴氏杆菌属（Pasteuria）的三个种以及根际细菌两类。芽孢杆菌属细菌是目前为止发现的有效根际生防细菌之一，在自然界中广泛存在，它生长快、营养简单、极易分离培养，该属细菌可以产生热稳定的芽孢，许多菌株可以产生多种生物活性代谢产物；在试剂生产和应用中，工艺简单，施用方便，稳定性高，有些菌株还具有增产的效果。因此，芽孢杆菌属细菌的生防潜力越来越受瞩目。 ? 本文通过研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus) HNXG-5菌株防治南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的二龄幼虫(J2)和卵的抑制效果、同时室内防效试验表明其对番茄生长有促进作用。此外，还研究了该菌株对象耳豆根结线虫、爪哇根结线虫、松材线虫的生物活性。 二、研究方法 用菌株 HNXG-5不同浓度菌悬液及发酵滤液处理南方根结线虫(J2)及其卵；可评价生防菌HNXG-5对南方根结线虫的防治效果。 HNXG-5菌株室内防效试验设在华南农业大学校园的温室内，供试植株为番茄品种夏钻石，育苗种子用0.1%的高锰酸钾溶液消毒15 min，然后用清水冲洗干净，放于无菌水中浸泡12 h，倒去清水，在28℃条件下催芽，在每个育苗钵中移植3棵出苗15d的长势较一致的番茄苗，两种处理方法接种。 为调查生防菌株对不同线虫的杀线虫广谱性，用搅拌机将病根搅碎，用改进贝曼漏斗法分离得到幼虫，用0.1% Naclo溶液消毒3min左右，灭菌水洗3次，置于培养基上，28℃培养箱培养，待细菌长出，进行纯化。分别测定HNXG-5菌株对爪哇根结线虫、象耳豆根结线虫(M.enterolobii)、松材根结线虫（ Bursaphelenchus xylophilus）的致死性。 三、研究结果 四、讨论与展望 本研究表明，枯草芽孢杆菌HNXG-5菌株对包括南方根结线虫、爪哇根结线虫、象耳豆根结线虫、松材线虫在内的几种线虫致死性试验证明，发现该菌具有一定的广谱杀线虫作用，因此及有效成分具有较大的研究意义，尚需进一步通过萃取等方法提取其有效成分。 本文通过两种不同处理，即在接种线虫前后5d分别接不同浓度的菌悬液，观察两种不同处理之间的差异，发现接菌时间不同，防治效果也不同，并且在接虫前接浓度为1×108菌悬液时防效达到最大，两种接菌方式对雌虫数量及单卵囊卵的数量影响比较大，在接虫后接菌雌虫数量与接虫前接菌相比显著降低。本试验还证明该菌不同浓度均能促进植物的生长。大田是一个开放的环境，土壤及气候环境对生防菌影响较大，为进一步验证该菌株的效果，需要通过大田试验进一步调查。  谢谢观赏 题目：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ) HNXG-5菌株对根结线虫活性研究 * 生物防治具有稳定、经济、长效和相对安全的特点，同时还能除害增产、减轻污染、保护生态环境。 * 南方根结线虫( Meloidotyne incongnita)二龄幼虫悬浮液的制备 从番茄病株根部挑取新鲜卵块,置于贝曼漏斗中孵化,24 h后开始收集二龄幼虫(J2),每天收集1次,共收集1周。将线虫悬浮液稀释为100条.mL-1,4℃保存待用。一种是在番茄根部附近打3个洞，将生防细菌发酵滤液50mL灌入番茄苗根部，5d后再把约1000条的南方根结线虫J2放人洞内，用土将其覆盖，45d后检查结果，另一种处理是在接虫后5d再浇灌菌液，其他和处理一相同。以空白培养液作对照。4个重复。 * * 从表1看出，HNXG-5菌悬液与上清液的各个处理均对南方根结线虫二龄幼虫（J2）都有显著的致死作用，在处理6h时只有上清液原液杀虫效果达到显著水平，随着处理时间的增长，杀线虫效果越明显，并且浓度越高杀线虫效果越好，处理24h上清液原液和菌悬液浓度为1×109时对根结线虫致死率分别比对照高94.00%和87.67%。 * 本试验表明，高浓度菌株上清液能明显抑制根结线虫卵的孵化，培养48h菌株上清液原液处理10d的抑制孵化率达到75%，随着浓度的降低，抑制孵化率能力降低，稀释至2倍、5倍孵化10d后抑制孵化率分别为70%和58%，在稀释至10倍浓度时，发酵滤液显著促进根结线虫的孵化；本试验表明，各种浓度在处理4d和6d时都表现一定的抑制孵化作用，浓度越高，抑制能力越强，其中1×109浓度与对照差异性明显，在处理8d 2×108浓度显著促进卵的孵化，其他浓度孵化抑制率降低，处理10d时各浓度均表现一定的促进卵孵化的能力，其中浓度为2×108时显著